酶聯免疫吸附試驗(ELISA)因其高靈敏度而受到青睞，能夠檢測出非常低濃度的物質（低至每毫升0.0001-0.01毫克）。它廣泛用于查找和測量肽、蛋白質、抗體、激素、藥物和潛在的食物過敏原，如牛奶、花生和雞蛋，這些對于轉基因食品檢測很重要。它的工作原理是利用抗原和抗體之間的特定相互作用，以及產生可檢測信號的酶。ELISA于20世紀70年代開發，利用抗體的精確度和酶的活性來分析生物樣本，從而提供一種靈敏而具體的方法。隨著時間的推移，ELISA不斷改進以提高其靈敏度，現在有不同類型的ELISA來檢測各種生物標志物。

  Elisa實驗方案：

  一、涂層：

  涂層將抗原或捕獲抗體固定在微量滴定板上。

  這是通過將培養皿與含有抗原或抗體的溶液一起孵育來完成的。

  抗原或抗體的選擇取決于具體的應用和靶分子。

  適當的濃度和孵育時間對于成功的檢測結果至關重要。

  二、阻塞：

  阻斷可防止微量滴定板上的非特異性結合。

  降低背景噪音并提高檢測特異性。

  用一抗或抗原包被后，向孔中添加封閉蛋白（例如，BSA、酪蛋白或牛奶）。

  阻斷蛋白質與未占據的位點結合，減少非特異性結合。

  孵育培養板以允許阻斷蛋白結合，然后用緩沖液洗去多余的蛋白。

  阻斷后，可將一抗或抗原添加到孔中。

  三、樣品和標準添加：

  標準通常是一組已知濃度的抗原，用于生成校準曲線。

  將已知濃度的標準品添加到板的單獨孔中，而將未知樣品添加到重復的或重復的三孔中。

  四、一抗孵育：

  此步驟涉及添加特定的一抗以結合微量滴定板上的抗原。

  一抗通常來自特定物種（例如小鼠或兔）并且可以被標記或未標記。

  如果一抗未標記，則稍后添加與酶（例如HRP或AP）偶聯的二抗以產生可測量的信號。

  五、二抗孵育：

  一抗-抗原復合物將二抗連接至微量滴定板。

  這種連接使得酶能夠與底物結合并產生可測量的信號。

  來自酶偶聯二抗的信號與樣品中一抗或抗原的量成比例。

  六、底物添加：

  底物與二抗偶聯的酶發生反應，產生可檢測的信號，該信號可使用微孔板讀數儀進行量化。

  顯色底物會產生可在特定波長下讀取的有色反應產物，而化學發光底物則會發出光，可通過光度計進行測量。

  應優化反應時間和底物濃度以產生足夠的信號而不引起背景噪音。

  七、停止解決方案：

  常用的終止溶液是硫酸，在底物孵育步驟后將其添加到孔中。

  添加終止溶液對于確保反應不再繼續以及產生的信號穩定且可重復至關重要。