在基本的細(xì)胞培養(yǎng)操作中，為了防止污染并安全地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，您應(yīng)該做一些事情，不應(yīng)該做一些事情。不僅包括適用于其他研究領(lǐng)域的一般事項(xiàng)，還包括細(xì)胞培養(yǎng)的具體預(yù)防措施。在本文的前半部分，我們將解釋細(xì)胞培養(yǎng)基本操作的注意事項(xiàng)。正確管理實(shí)驗(yàn)環(huán)境和儲(chǔ)存材料不僅對(duì)您自己的研究很重要，而且還能避免打擾其他實(shí)驗(yàn)室成員。請(qǐng)仔細(xì)閱讀并用于您的實(shí)驗(yàn)。

 

  我們還將在本文后面討論細(xì)胞培養(yǎng)中的無(wú)菌技術(shù)。我們整理了您需要采取的預(yù)防措施清單，以防止細(xì)菌、真菌、支原體等引起的交叉污染，請(qǐng)也參考一下。

 

  細(xì)胞培養(yǎng)中應(yīng)該做什么

 

  首先，我們來(lái)檢查一下實(shí)驗(yàn)者本人的著裝。始終遵循安全標(biāo)準(zhǔn)以在實(shí)驗(yàn)室中保護(hù)自己。需要個(gè)人防護(hù)裝備（實(shí)驗(yàn)室外套、實(shí)驗(yàn)室手套、安全眼鏡）。特別是，在處理液氮時(shí)，請(qǐng)務(wù)必遵守各實(shí)驗(yàn)室制定的規(guī)定，例如使用特殊的絕緣手套、全臉面罩、防濺圍裙和手套。另外，為了防止頭發(fā)污染，最好將長(zhǎng)發(fā)扎起來(lái)或戴上帽子。

 

  為避免空氣傳播細(xì)菌，請(qǐng)將正常實(shí)驗(yàn)和組織培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)服和鞋分開(kāi)，并避免污染培養(yǎng)室環(huán)境。通過(guò)穿著不同顏色的夾克或?qū)嶒?yàn)室外套更容易區(qū)分它們。

 

  接下來(lái)說(shuō)一下實(shí)驗(yàn)環(huán)境的準(zhǔn)備。始終保持超凈工作臺(tái)、工作臺(tái)以及其他處理細(xì)胞的區(qū)域周?chē)鷧^(qū)域的清潔。避免將紙板等包裝物放置在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的區(qū)域。請(qǐng)務(wù)必定期檢查和清潔培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、顯微鏡等，保持清潔。

 

  所有使用的材料，如試劑、燒瓶和培養(yǎng)基，都應(yīng)貼上標(biāo)簽或標(biāo)明日期和內(nèi)容，以明確里面的內(nèi)容。另外，使用前請(qǐng)務(wù)必檢查所用培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量。每天檢查培養(yǎng)基是否有細(xì)菌或真菌污染的跡象。即使您購(gòu)買(mǎi)了市售的培養(yǎng)基，也請(qǐng)務(wù)必進(jìn)行此項(xiàng)檢查。

 

  所有與細(xì)胞直接接觸的培養(yǎng)箱、培養(yǎng)設(shè)備、培養(yǎng)基等必須無(wú)菌，防止微生物污染。因此，所有使用過(guò)的物品都必須進(jìn)行滅菌或消毒。

 

  一般用于消毒的酒精有效濃度為乙醇70%左右，異丙醇60-70%左右，通過(guò)脫水凝固進(jìn)行消毒。乙醇對(duì)大多數(shù)病毒有效（不適用于沒(méi)有外殼的病毒），異丙醇對(duì)病毒無(wú)效。

 

  滅菌主要有三種：高壓滅菌、干熱滅菌和過(guò)濾滅菌。

 

  接下來(lái)，在實(shí)際操作過(guò)程中，還有一些需要注意的地方。嘗試一次僅使用一種類型的細(xì)胞系。這降低了交叉污染和錯(cuò)誤標(biāo)簽的風(fēng)險(xiǎn)。此外，如果超凈工作臺(tái)中發(fā)生細(xì)菌或支原體的氣溶膠傳播，受影響的瓶子和燒瓶也會(huì)減少。

 

  在操作之間使用合適的消毒劑（例如70%乙醇）對(duì)工作表面進(jìn)行消毒，并在處理不同細(xì)胞系之間等待至少15分鐘。培養(yǎng)過(guò)程中，每個(gè)細(xì)胞系的培養(yǎng)基瓶盡可能遠(yuǎn)離。應(yīng)定期檢測(cè)細(xì)胞是否有支原體感染。

 

  細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不要做什么

 

  培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免的事項(xiàng)是：

 

  首先，盡可能避免在培養(yǎng)基中連續(xù)添加抗生素。抗生素抗藥性細(xì)菌更有可能出現(xiàn)，污染也變得更難以識(shí)別。然后，每次處理廢物，避免在培養(yǎng)箱或超凈工作臺(tái)中留下任何廢物。

 

  確保不要太多人同時(shí)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室也很重要，以避免細(xì)菌污染空氣。此外，來(lái)源不明的細(xì)胞不應(yīng)在主細(xì)胞培養(yǎng)室中處理。隔離處理這些細(xì)胞，直到完成質(zhì)量控制檢查。

 

  培養(yǎng)的細(xì)胞達(dá)到100%匯合也是不希望的。避免讓細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到100%匯合（匯合：細(xì)胞覆蓋培養(yǎng)容器的表面）。始終以70-80%匯合度或根據(jù)細(xì)胞隨附的數(shù)據(jù)表進(jìn)行培養(yǎng)。

 

  最后，避免使用過(guò)期的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的使用期限通常約為4至6個(gè)月（如果保存在4°C且含有谷氨酰胺和血清）。

 

  防止污染的無(wú)菌技術(shù)

 

  接下來(lái)，我們將解釋防止細(xì)菌、真菌、支原體等交叉污染的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)防措施。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有自己獨(dú)特的程序，因此請(qǐng)參閱每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的協(xié)議以了解詳細(xì)信息。

 

  必要的設(shè)備和試劑

 

  70%(v/v)乙醇

 

  甲酚皂溶液

 

  合適的消毒劑

 

  <上班前的注意事項(xiàng)>

 

  進(jìn)行任何工作之前，請(qǐng)用甲酚皂徹底洗手。

 

  使用70%乙醇徹底擦拭超凈工作臺(tái)。

 

  用70%乙醇噴灑實(shí)驗(yàn)室手套并將它們摩擦在一起。

 

  開(kāi)始工作前，將所有材料和設(shè)備放置在潔凈的工作臺(tái)上。用70%乙醇擦拭潔凈工作臺(tái)設(shè)備和細(xì)胞培養(yǎng)用設(shè)備（中瓶、移液器等）。

 

  <工作時(shí)的注意事項(xiàng)>

 

  在超凈工作臺(tái)內(nèi)工作時(shí)，避免觸摸工作臺(tái)內(nèi)以外的任何物體（尤其是臉部和頭發(fā)）。如果發(fā)生接觸，請(qǐng)用70%乙醇噴灑手套并徹底擦洗。

 

  在超凈工作臺(tái)上慢慢地工作，不要著急。通過(guò)慢慢地這樣做，您可以使超凈工作臺(tái)內(nèi)的空氣流通。

 

  潔凈工作臺(tái)前嚴(yán)禁說(shuō)話、打噴嚏、咳嗽。

 

  <下班后的筆記>

 

  丟棄用于培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室手套，以防止污染。

 

  所有設(shè)備和試劑在從超凈工作臺(tái)上移出之前均經(jīng)過(guò)滅菌。用70%乙醇擦拭工作表面。

 

  將用吸引器吸出的培養(yǎng)基收集到裝有滅菌溶液的收集器中，并收集其他設(shè)備和溶液，在高壓滅菌器中滅菌，然后清洗或處理。

 

  定期用消毒劑清潔超凈工作臺(tái)內(nèi)部或遵循制造商的說(shuō)明。

 

  以上，我們解釋了細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的注意事項(xiàng)以及細(xì)胞培養(yǎng)前的無(wú)菌操作。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)需要注意的事項(xiàng)有很多，可能看起來(lái)很難上手，但如果遵循基礎(chǔ)知識(shí)，其實(shí)并沒(méi)有那么困難。仔細(xì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，檢查每項(xiàng)操作和需要記住的要點(diǎn)。