ELISA是一種對于幫助定量給定樣品中存在的靶標數量非常重要的程序。正確準備樣品至關重要，這對于確定ELISA 實驗是否成功至關重要。

 

  樣品準備好后，可以將其等分并冷凍以進行長期儲存。建議儲存條件如下：2-8°C 5 天，-20°C 6 個月，-80°C 2 年。還建議從存儲中取出樣品時避免重復凍融循環，這就是為什么最好以較小的等分試樣存儲樣品。

 

  有許多不同的樣品可用于ELISA 方法。下面將討論一些最常見的樣品，并將提供有關如何最好地準備每個樣品的一般說明。但是，我們建議遵循每個試劑盒提供的具體說明，因為一個試劑盒與另一個試劑盒的方案可能略有不同。

 

  不同的樣品類型

 

  一、血液樣本

 

  血清：不含任何血細胞或凝血因子；它就像沒有纖維蛋白原的血漿。

 

  （a）使用血清分離管收集全血樣本，方法是將其在室溫下靜置 2 小時或在 2-8°C 之間過夜。需要注意的是，這是一種自然的血液凝固方法。此外，如果溫度降低，凝血過程也會減慢。

 

  （b）、然后將樣品以 1000 x g 離心 20 分鐘。

 

  （c）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （d）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  血漿（EDTA、檸檬酸、肝素）：這些樣品需要抗凝，這取決于所使用的目標分析物。

 

  （a）、將血漿收集到含有所需抗凝劑的試管中并輕輕混合。

 

  （b）、收集樣品后 30 分鐘內將樣品在 2-8°C 下以 1000 xg 離心 15 分鐘。

 

  （c）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （d）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  組織樣本

 

  幾乎所有的組織樣本都被加工成組織勻漿。所使用的方案很大程度上取決于將用作樣本的提取組織。可能需要包括額外的蛋白質抑制劑以最小化或防止分析物的任何進一步降解。

 

  （a）、必須使用干凈的工具解剖組織，然后必須將其快速放置在冰上以防止蛋白酶發生任何潛在的降解。

 

  （b）、使用預冷卻的 0.01M PBS 緩沖液（pH 7.4）清洗組織，這應該去除可能存在的任何殘留血液。

 

  （C）、然后在均質化之前稱量組織。

 

  （d）、將處理后的勻漿以 5000 xg 離心 5 分鐘。

 

  （e）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （F）可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  已發現一些組織樣本顯示假陽性結果，這是由于內源生物素與親和素和鏈霉親和素相互作用。這些組織的包括腎、肝、胰腺和腦組織。

 

  細胞樣本

 

  細胞裂解物：首先需要裂解細胞，以便將其用于ELISA 分析。裂解步驟可以是使用 Triton X-100、脫氧膽酸鈉、RIPA、SDS、DTT 和尿素等試劑的化學過程，也可以是物理過程，例如使用重復凍融循環或超聲處理。一般來說，物理程序是更好的選擇，因為使用化學品可能會對ELISA 結果產生下游影響。

 

  （a）、使用胰蛋白酶溶液將貼壁細胞分離成懸浮液，然后將其離心，并將上清液收集到干凈的管中。可以將已經懸浮的細胞離心并收集上清液。

 

  （b）、將細胞加入預冷的 PBS 中并洗滌 3 次。

 

  （c）、然后使用化學或物理方法裂解細胞。例如：可添加0.5ml RIPA裂解緩沖液，超聲四次或凍融樣品四次。

 

  （d）、以 1500 xg 離心 10 分鐘，以去除可能存在的細胞碎片。

 

  （e）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （f）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  （g）、細胞培養上清液：當研究分泌蛋白作為目標分析物時，強烈推薦這種樣品類型。

 

  （h）、1000 xg 離心 20 分鐘，這將去除可能存在的任何沉淀物。

 

  （l）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （j）可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

   唾液、牛奶和尿液樣本

 

  這些樣本變得越來越受歡迎，因為與血液樣本相比，它們的侵入采集程序要少得多。它們經常用于檢測大量抗微生物劑、分泌的分析物和許多其他生物酶。

 

  （a）、樣品收集在無菌離心管中。

 

  （b）、然后在 2-8°C 下以 10,000 xg 離心 2 分鐘或以 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘。

 

  （c）、’將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （d）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  痰標本

 

  痰可以被描述為主要存在于呼吸道中的粘液和唾液的混合物。通常通過咳嗽從肺部排出。痰中可能存在許多令人特別感興趣的病原菌。

 

  （a）、對痰的粘稠部分進行稱重。

 

  （b）、稱取的痰液中加入等量的0.1% DTT（具有溶解痰液的作用），并在35℃下混合5分鐘。

 

  （c）、將等量的 PBS 添加到混合物中（1/2 稀釋），繼續混合 15-20 分鐘。

 

  （d）、使用金屬絲網過濾混合物。

 

  （e）、1500 rpm 離心 10 分鐘。

 

  （f）、’將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （g）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  腦脊液、腹水和支氣管肺泡灌洗液 (BALF) 樣本

 

  （a）、收集樣品后，以 1,2000 rpm 離心 20 分鐘。

 

  （b）、檢查確保沒有沉淀，如果有沉淀需要重新離心。

 

  （c）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （d）、’可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  精液樣本

 

  （a）、精液樣本應收集在無菌容器中。

 

  （b）、將容器放入室溫或 37°C 的水浴中。這將使纖溶酶使精液變稀并液化。

 

  （c）、將液化精液以4000rpm離心10分鐘，以分離精漿。

 

  （d）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （e）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。

 

  糞便樣本

 

  （a）、收集超過 50 毫克的干糞便樣本。值得注意的是，稀釋的糞便樣本更難處理，并且更難以檢測，因為準確性降低。

 

  （b）、使用 PBS 將糞便樣本清洗 3 次。

 

  （c）、離心步驟后，用 PBS 重懸（1g 糞便與 9ml PBS 的比例）。可以使用超聲波粉碎溶液。

 

  （d）、5000 xg 離心 10 分鐘。

 

  （f）、將上清液轉移至干凈的管中。

 

  （g）、可以立即分析，也可以冷凍（-20°C 或-80°C）以供以后使用。