ELISA是生物實(shí)驗(yàn)不可缺的一部分，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)ELISA原理及類型的了解有助于更好的實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)效果。今天由上海通蔚給大家介紹一下ELISA原理和類型。
  
  內(nèi)容：
  
  什么是ELISA？
  
  ELISA基本原理？
  
  ELISA優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？
  
  ELISA的類型？
  

  什么是ELISA？

  

  ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定）是一種檢測(cè)生物樣品中抗原是否存在的技術(shù)。與其他類型的免疫測(cè)定一樣，ELISA 依賴于抗體，利用高度特異性的抗體-抗原相互作用來(lái)檢測(cè)目標(biāo)抗原。

上海通蔚elisa試劑盒

  

  ELISA 基本原理

  

  在 ELISA 測(cè)定中，抗原被固定到固體表面。這可以直接完成，也可以通過(guò)使用固定在表面上的捕獲抗體本身來(lái)完成。然后將抗原與檢測(cè)抗體復(fù)合，該檢測(cè)抗體與適合檢測(cè)的分子（例如酶或熒光團(tuán)）綴合。

  
  圖 2. ELISA 測(cè)定的基本設(shè)置。多孔板上的捕獲抗體將固定的抗原。該抗原將被與生物素和鏈霉親和素-HRP 綴合的檢測(cè)抗體識(shí)別并結(jié)合。
  
  ELISA 測(cè)定通常在多孔板（96 或 384 孔）中進(jìn)行，多孔板提供固定抗原的固體表面。分析物的固定有助于將抗原與樣品中的其余成分分離。這一特性使得 ELISA 成為同時(shí)對(duì)多個(gè)樣品進(jìn)行的最簡(jiǎn)單的檢測(cè)方法之一。
  

  ELISA優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？

  
  ELISA 的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)
  
  優(yōu)點(diǎn)
  
  ? 高靈敏度和特異性：由于使用了抗體，ELISA 通常能夠以非常特異的方式檢測(cè)皮克水平的抗原。
  
  ? 高通量：商業(yè) ELISA 試劑盒通常以 96 孔板形式提供。但該測(cè)定可以輕松適應(yīng) 384 孔板。
  
  ? 易于執(zhí)行：協(xié)議易于遵循，幾乎不需要?jiǎng)邮植僮鲿r(shí)間。
  
  ? 定量：可以測(cè)定樣品中抗原的濃度。
  
  ? 可以測(cè)試各種樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞和組織提取物、尿液和唾液等。
  
  缺點(diǎn)
  
  ? 臨時(shí)讀數(shù)：檢測(cè)基于酶/底物反應(yīng)，因此必須在短時(shí)間內(nèi)獲得讀數(shù)。
  
  ? 有限的抗原信息：信息僅限于樣品中抗原的數(shù)量或存在。
  

  ELISA 的類型

  
  ELISA 主要有四種類型：直接 ELISA、間接 ELISA、夾心 ELISA 和競(jìng)爭(zhēng) ELISA。每個(gè)都有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)、缺點(diǎn)和適用性。
  

  直接ELISA

  
  在直接 ELISA 中，抗原被固定到多孔板的表面，并用對(duì)該抗原具有特異性的抗體進(jìn)行檢測(cè)。該抗體直接與 HRP 或其他檢測(cè)分子綴合。
  

  間接ELISA

  
  間接 ELISA是一種采用兩步過(guò)程進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，其中對(duì)抗原具有特異性的一抗與靶標(biāo)結(jié)合，而針對(duì)一抗宿主物種的標(biāo)記二抗與一抗結(jié)合進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于直接 ELISA 測(cè)定，抗原固定在多孔板的表面。
  
  該方法還可用于通過(guò)用血清代替一抗來(lái)檢測(cè)血清樣品中的特異性抗體。
  
  夾心ELISA
  
  夾心 ELISA（或夾心免疫測(cè)定）是最常用的形式。這種形式需要兩種針對(duì)抗原不同表位的特異性抗體。這兩種抗體通常稱為匹配抗體對(duì)。其中一種抗體包被在多孔板的表面并用作捕獲抗體以促進(jìn)抗原的固定。另一種抗體被綴合并促進(jìn)抗原的檢測(cè)。
  

  競(jìng)爭(zhēng)性ELISA

  
  競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA 測(cè)定也稱為抑制 ELISA 或競(jìng)爭(zhēng)性免疫測(cè)定，通過(guò)檢測(cè)信號(hào)干擾來(lái)測(cè)量抗原濃度。之前的每種賽制都可以適應(yīng)競(jìng)爭(zhēng)賽制。
  
  樣品抗原與參考抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特定量的標(biāo)記抗體。將參考抗原預(yù)涂在多孔板上，將樣品與標(biāo)記抗體預(yù)孵育并添加到孔中。根據(jù)樣品中抗原的量，或多或少的游離抗體將可用于結(jié)合參考抗原。這意味著樣品中的抗原越多，檢測(cè)到的參考抗原越少，信號(hào)越弱。
  

  一些競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA 試劑盒使用標(biāo)記抗原而不是標(biāo)記抗體。標(biāo)記抗原和樣品抗原（未標(biāo)記）競(jìng)爭(zhēng)與一抗的結(jié)合。樣品中抗原的量越低，由于孔中標(biāo)記的抗原越多，信號(hào)越強(qiáng)。

  我應(yīng)該使用哪種類型的 ELISA？

	優(yōu)點(diǎn)	缺點(diǎn)
直接elisa	方案短：節(jié)省時(shí)間和試劑。 與二抗無(wú)交叉反應(yīng)。	潛在的高背景：樣品中的所有蛋白質(zhì)都與表面結(jié)合。 無(wú)信號(hào)放大。 靈活性低：一抗必須偶聯(lián)。
間接elisa	信號(hào)放大：多個(gè)二抗將與一抗結(jié)合。 高靈活性：同一個(gè)二抗可用于多種一抗。	與直接 ELISA 相比，實(shí)驗(yàn)方案較長(zhǎng)。 二抗的潛在交叉反應(yīng)性。
夾心elisa	高特異性：涉及兩種抗體檢測(cè)同一抗原上的不同表位。 適用于復(fù)雜樣品。 靈活性和靈敏度高：直接法和間接法均可使用。	要求嚴(yán)格的設(shè)計(jì)：找到針對(duì)同一目標(biāo)的兩種抗體， 它們能夠識(shí)別不同的表位并且能夠很好地協(xié)同工作，有時(shí)可能具有挑戰(zhàn)性。
競(jìng)爭(zhēng)elisa	取決于所選的基礎(chǔ) ELISA。 適用于小抗原。	取決于所選的基礎(chǔ) ELISA