酶聯免疫試劑盒(ELISA)是一種常用的分析生化檢測，由Eva Engvall和Peter Perlmann于1971年首次描述。是一種固相類型的酶免疫測定(EIA)，使用酶聯免疫技術針對待測蛋白質的抗體來檢測液體樣品中配體（通常是蛋白質）的存在。ELISA已被用作醫學、植物病理學和生物技術的診斷工具，以及各個行業的質量控制檢查。相關閱讀：《什么是酶聯免疫試劑盒》

  什么是酶聯免疫技術？

  酶聯免疫技術（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA），1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)。ELISA現在已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(immunoenzymatic techniques)的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術。

酶聯免疫技術

  ELISA的類型

  ELISA可分為三種主要類型：夾心、間接和競爭。

  夾心ELISA

  首先，“捕獲”抗體與孔結合。然后，添加樣品后，僅“捕獲”抗體識別的蛋白質。最后，使用第二檢測抗體進行結合蛋白的檢測。檢測和捕獲抗體也稱為匹配抗體對或匹配對。最后，使用酶標二抗檢測檢測抗體。

  間接ELISA

  在這種類型的ELISA中，蛋白質樣品通過吸收直接結合到孔中。然后，使用稱為抗原的抗體檢測樣品中蛋白質的存在。在這種類型中，由于每個一抗中存在大量允許信號放大的表位，因此靈敏度增加。

  競爭性ELISA

  在這里，一抗的存在與樣品一起產生，形成復合物。當復合物沉淀后，將二抗添加到孔中。僅當抗原未與其結合時，一抗才能被識別。因此，可見二抗與抗原競爭。

  酶聯免疫試劑盒基本組成

  一個完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

  1、已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

  2、酶標記的抗原或抗體（結合物）；

  3、酶的底物；陰性對照品和陽性對照品（定性），參考標準品和控制血清（定量）；

  4、酶聯物（結合物）及樣本的稀釋液；

  5、’洗滌液；酶反應終止液。

  酶聯免疫試劑盒原理

  酶聯免疫試劑盒（ELISA）是一種將抗原-抗體結合反應與酶催化反應相結合的免疫分析方法。該方法的基本原理是將抗原或抗體吸附到固相載體表面，然后加入酶標記的二抗，形成酶標抗原-抗體復合物。當底物溶液加入到反應體系中時，底物在酶的催化下發生化學反應，產生顏色變化。通過檢測顏色變化，可以確定是否存在待檢測的抗原或抗體。

  酶聯免疫試劑盒的應用與優勢

  酶聯免疫吸附測定(ELISA)是應用最廣泛的免疫測定類型之一，比RIA更安全、更容易。ELISA涉及使用酶活性作為檢測抗體-酶綴合物結合的手段。酶在其催化的反應和其識別的底物方面具有特異性，并受到其他分子對其活性的調節。因此，由于酶的特異性和酶催化產生的擴增現象，酶的使用可能是有利的。ELISA的檢測類型有所不同，當酶標記產生有色產物時，通常采用分光光度法；當酶催化氧化還原化學反應時，通常采用電化學法。ELISA的主要缺點是酶活性依賴于物理和化學環境。

  酶聯免疫試劑盒局限性和挑戰

  在使用酶聯免疫試劑盒進行免疫測定實驗過程，難免會出現一些問題，比如假陽性。這里上海通蔚生物為各位盤點了一下。

  假陽性結果的可能原因包括：

  1、交叉反應：不同分子之間可能存在交叉反應，導致非特異性信號的產生，從而產生假陽性結果。

  2、樣本污染：樣本處理過程中的污染或者不潔凈的工作環境可能會引入外部干擾物質，干擾實驗結果的準確性。

  3、操作不當：操作過程中的技術不到位或者操作失誤，如試劑的過量使用、溫度控制不當等，都可能導致假陽性的產生。

  4、試劑盒質量：試劑盒的質量問題，如存儲條件不當、過期等，可能影響試劑盒的穩定性和準確性，從而導致假陽性結果的出現。

  假陰性結果的可能原因包括：

  1、抗體交叉反應：ELISA試劑盒使用的抗體可能會與其他非目標分子結合，導致假陰性結果。

  2、固相抗體和酶標二抗的變構：固相抗體和酶標二抗可因其吸附及結合過程中抗體分子發生變構，使Fc段的補體C1q結合點暴露出來，使C1q成為一個中介物將二者交聯起來，導致假陰性結果。

  3、外源性干擾因素：如標本溶血、標本被細菌污染、標本保存時間過長和標本凝固不全等，都可能影響抗原與抗體的結合，導致假陰性結果。

  為了減少假陽性或假陰性結果的出現，可以采取以下措施：

  1、優化試劑盒和實驗條件：選擇質量可靠的試劑盒，并嚴格按照說明書操作，優化實驗條件，降低假陽性或假陰性的風險。

  2、嚴格控制樣本來源和處理過程：保證樣本的純凈性和完整性，避免樣本污染或者其他外部因素的干擾。

  3、增加質控步驟：在實驗過程中增加質控步驟，監測實驗的穩定性和準確性，及時發現問題并進行調整。

  4、合理選擇陽性和陰性對照：選擇適當的陽性和陰性對照，確保實驗結果的可靠性和準確性。

  5、多方驗證實驗結果：如有條件，可以采用其他方法對實驗結果進行驗證，提高數據的可信度和可靠性。

  希望大家可以通過上述方法避免ELISA實驗帶來假陽性，假陰性溫度，最大化提高實驗的效率。

  未來展望

  自1590年Zacharias Janssen和Hans Janssen發現光學顯微鏡以來，實驗室檢查經歷了重大演變。Eva Engvall和Peter Perlman于1971年開發的ELISA（酶聯免疫吸附測定）方法標志著一個重要的里程碑在顯微實驗室測試中。該方法為疾病診斷、生物研究、醫學等科學領域做出了重大貢獻。在ELISA方法中，抗原、抗體和酶與底物之間的反應發生在孔微孔板內，并且可以通過分光光度法來測量結果。ELISA具有操作簡單、靈敏度高、效率好等優點。然而，也存在一些挑戰，例如抗體制備成本高以及假陽性/陰性結果的可能性。盡管如此，ELISA仍然是當今實驗室檢查中最常用的方法之一，在疾病診斷、健康監測和研究中有多種應用。隨著技術的不斷進步，預計未來ELISA方法將不斷發展，為提高醫療質量和科學認識做出更大的貢獻。