什么是elisa試劑盒？elisa是最經典的一種免疫學實驗操作實驗，中文名字叫酶聯免疫吸附測定實驗。酶聯免疫吸附實驗（elisa）是一種用來定量檢測樣本中的某種抗原方法。因此，因此在許多研究和檢測領域中使用 ELISA 來檢測和定量各種樣本類型中的抗原，如使用 ELISA 分析細胞裂解物、血樣、食品等特定物質。常見檢測領域包括如生物學、醫學、農學等。

Elisa試劑盒原理

酶聯免疫吸附實驗（elisa）是一種高敏度的定量實驗，通常用于測量生物樣品中分析物的濃度，如細胞因子和抗體。這種方法的一般原理包括三個步驟：

首先是將目標分析物捕獲或固定在微孔板上，然后用目標特異性檢測蛋白檢測分析物，最后就是酶反應，既共軛酶將底物轉化為有色產物。根據不同的捕獲方法和檢測方法，elisa可以分為四種方法。

elisa方法

ELISA有四種主要的方法：直接法、間接法、夾心法和競爭法。每種類型的描述如下，并用圖說明了分析物和抗體是如何結合和使用的。

1.直接法（酶標抗體結合抗原）

待測抗原粘附在微孔板的孔內，然后使用帶酶標的一抗與抗原結合，最后加入底物進行顯色，并檢測吸光度。由于吸光度的大小與抗原體復合物的數量成一定的線性關系。因此，也就間接的實現了測定抗原數量的目標。

2.間接法（一抗結合抗原，酶標二抗結合一抗）

和直接法的區別在于兩種抗體代替一種抗體，結合抗原的抗體（一抗）不帶酶標記物，當抗原和抗體結合后，再使用帶酶標的二抗結合一抗，加入底物顯色并檢測。

3.夾心法（捕獲抗體和一抗結合抗原，酶標二抗結合一抗）

在間接法基礎上又再發展出更為復雜的夾心法，它在微孔底部預先包被一種捕獲抗體，用于結合抗原，在這個復合物的基礎上再結合一抗、二抗并檢測。

	直接法	間接法、夾心法
優點	操作簡單 不存在抗原和二抗發生交叉反應導致的結構錯誤	二抗選擇面廣泛，制備也比較簡單，大大降低成本；酶標種類也有更多選擇 一抗無需考慮標記酶標信息，所以它在制備過程可以盡可能的保證免疫結合活性，檢測靈敏度大大提高，因為信號得到放大。
缺點	檢測抗體制備比較困難且成本比較高，因為既要保證免疫活性還要標記酶信息，檢測信號無法放大，信號越弱	潛在的二抗與目標抗原發生反應，造成信號錯亂風險，更多操作步驟，反應時間更長。

  4.競爭法（酶標抗原和抗原競爭結合抗體）
  
  無法同時結合捕獲抗體和一抗的話，就不適合用夾心檢測。此時可以在微孔板孔內包被抗體，同時提供帶標記的同種抗原，把待檢測抗原和標記抗原一起加入和抗體結合，由于兩者會競爭結合抗體，所以最終檢測的信號越高，證明代測抗原越少，反之則越多。

  

  Elisa試劑盒檢測步驟

  
  ELISA 是最簡單的血液檢測之一。它快速、快捷，并且需要患者的血液樣本。ELISA的整個過程如下所述。
  
  抗體附著在作為固體表面的聚苯乙烯板上，并被細菌、其他抗體和激素吸引或具有親和力。
  
  將抗原-抗體混合物填充到包被有抗原的微量滴定板上，然后通過洗滌除去游離抗體。
  
  添加對一抗具有特異性的二抗，該二抗通常與酶結合。
  
  通過清洗板去除游離的酶聯二抗。
  
  最后，添加底物。底物被酶轉化形成有色產物，可以通過分光光度法進行測量。
  
  通過ELISA檢測表明懷孕的HCG蛋白。將血液或尿液樣本和與酶連接的純化 HCG 組合添加到系統中。如果測試樣品中不存在 HCG，則只有連接的酶與固體表面結合。
  

  感興趣的物質越多，發生的反應就越多，與固體表面結合的連接酶就越少。這些反應通常通過溶液顏色的變化來指示。

  

  Elisa試劑盒的優點

  
  以下是 ELISA 技術的一些優點：
  
  由于使用了兩種抗體，從 ELISA 獲取的結果可以準確診斷特定疾病。
  
  可以對復雜的樣品進行檢測，因為不需要純化抗原即可檢測。
  
  由于可以進行直接和間接分析方法，因此反應靈敏。
  
  這是一個快速測試，很快就能得出結果。
  
  ELISA 的可能檢測范圍包括定量、半定量、標準曲線、定性、校準曲線模型等。
  
  與需要放射性物質存在的其他測定相比，更容易執行且過程簡單。
  

  elisa試劑盒是用來檢測什么的

  
  Elisa檢測如下：
  
  可以確定樣品中抗體和抗原的存在。
  
  它在食品工業中用于檢測存在的任何食品過敏原。
  
  測定病毒測試中血清抗體的濃度。
  
  在 疾病爆發期間，為了評估疾病的傳播，例如在最近的 COVID-19 爆發期間，正在使用快速檢測試劑盒來確定血液樣本中是否存在抗體。
  

  ELISA常見問題解答

  
  1. 試劑盒從冰箱拿出后未充分平衡室溫，會有什么影響？
  
  如果試劑盒從冰箱中拿出后未充分平衡至室溫（20～25℃），可能會導致溫育時間不夠，從而使OD值偏低。
  
  2. 移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔，會造成什么后果？
  
  移液器吸液量不足或吸頭內壁不清潔，都可能導致加樣量不足，造成OD值偏低。此外，吸頭內壁不清潔還可能導致非特異性吸附，進一步影響實驗結果。
  
  3. 操作順序顛倒或遺漏步驟，會有什么后果？
  
  如果操作順序顛倒或遺漏步驟，很可能導致實驗失敗，例如漏加酶結合物、顯色劑等，使整塊ELISA板都不顯色。
  
  4. 溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求，會有什么影響？
  
  溫育時間不夠或溫育溫度未達到要求，都會影響反應的進行，導致OD值偏低。例如，保溫用的濕盒沒有預溫，或培養箱溫度不符合操作要求等。
  
  5. 洗板液在配置過程中出現問題，會造成什么后果？
  
  洗板液在配置過程中出現問題，如量筒不干凈、含有酶抑制物、濃度過高等，都可能導致洗去特異性結合物，使OD值偏低。
  
  6. 洗板時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗板次數過多，會有什么影響？
  
  這些操作都可能導致洗去結合在包被板的特異性結合物，從而使OD值偏低。
  
  7. 加完終止液后沒有輕輕充分混勻ELISA板液就立即讀數或放置太久才進行讀數，會有什么影響？
  
  這可能導致檢測OD值偏低或偏高。一般建議在加完終止液后3分鐘之內進行讀數。
  
  8. 酶標儀檢測波長設定有誤，會有什么后果？
  
  如果酶標儀檢測波長設定有誤，例如選用的波長不是產物的敏感吸收峰，可能會導致OD值偏低或偏高。
  
  9. 陰性對照出現陽性結果，可能的原因是什么？
  
  陰性對照出現陽性結果可能是由于樣品、試劑被污染，或加樣時操作不當導致相鄰孔之間溶液濺灑出現交叉污染。此外，抗體量過多導致非特異性結合也可能是一個原因。
  
  10. 酶標板整體背景高，可能的原因是什么？
  
  酶標板整體背景高可能是由于底物孵育過程沒有避光，導致背景信號增強。
  
  11. 復孔之間重復性差，可能的原因是什么？
  
  復孔之間重復性差可能是由于加樣本及試劑量不準、孔間不一致等原因造成的。此外，操作條件、人員等的不一致也可能導致重復性差。
  
  12. 陽性對照值偏低或低吸光度，可能的原因是什么？
  
  陽性對照值偏低或低吸光度可能是由于溫育的時間或溫度不夠、顯色反應時間太短、顯色液變質或試劑過期、試劑稀釋有誤等原因造成的。