免疫測定在臨床診斷和生物制藥領域具有廣泛的應用，可用于分析物的定量、定性和半定量分析。酶聯免疫吸附測定 (ELISA) 和蛋白質印跡等免疫測定使用抗體來檢測分析物，方法是響應抗體與其靶抗原的結合而產生可測量的信號。免疫測定通常需要兩種類型的抗體：一抗和二抗。一抗特異性結合抗原，而二抗結合一抗。在這里，我們將討論一抗和二抗在免疫測定中的工作原理、它們的生產方法以及如何選擇用于免疫測定的抗體。關于什么是一抗二抗可以參考《免疫學檢測：一抗和二抗簡介》

  一抗和二抗如何發揮作用？

  免疫測定有 3 個主要組成部分：
  
  1、目標分析物：樣品中檢測到的抗原。
  
  2、抗體
  
    一抗：與目標抗原結合。
  
    二抗：與一抗結合。
  
  3、標記：與一抗或二抗綴合的標記，可產生可測量的信號

  直接與間接免疫測定

  免疫測定有兩種類型：直接免疫測定和間接免疫測定（圖 1）。在直接免疫測定中，標記物與一抗結合，并在抗原結合時產生可測量的信號（圖 1，左）。因此，直接免疫測定是一種一步檢測方法，不需要二抗進行檢測。

  圖 1.直接與間接免疫測定。直接免疫測定利用與信號分子綴合的一抗。間接免疫測定需要一抗來檢測抗原，以及二抗與一抗結合并產生可測量的信號。在此示例中，與二抗綴合的 HRP 酶通過化學發光反應將 HRP 底物催化成可檢測的光。

  間接免疫測定利用一抗和二抗進行抗原檢測（圖 1，右）。一抗與抗原結合，二抗與一抗結合并通過綴合標記促進檢測。二抗有助于信號放大，因為多個二抗將與單個一抗結合。擴增過程可以實現低豐度抗原的可視化，并提高免疫測定的靈敏度。直接和間接免疫測定法各有優缺點，如 表 1 所示。

  免疫測定中使用的標記類型

  與抗體結合的標記會產生信號，從而可以定量和檢測樣品中的抗原。免疫測定中使用多種類型的標記，其選擇取決于所進行測定的具體要求。一些常見的例子包括：

  酶：最常見的抗體標記類型。通常摻入的酶是辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）。酶聯抗體的免疫測定通過化學發光或比色檢測方法進行分析。酶常用于蛋白質印跡、免疫組織化學 (IHC) 和 ELISA 等技術。

  熒光染料：熒光染料，例如：異硫氰酸熒光素 (FITC)、德克薩斯紅和羅丹明。熒光染料在特定波長下的激發會產生不同且更長波長的發射。熒光染料廣泛用于免疫熒光顯微鏡等技術。

  放射性同位素：用放射性同位素標記的抗體通過結合的抗體復合物發射的放射性進行測量。放射性同位素通常用于放射免疫測定 (RIA)，但由于非放射性替代品的出現，其使用量有所減少。

  生物素：生物素是一種可以與抗體結合的小分子。生物素可以用鏈霉親和素綴合物（例如鏈霉親和素-HRP）檢測。

  一抗和二抗是如何產生的？

  一抗是通過體內和體外技術相結合產生的，例如雜交瘤生成、單 B 細胞測序和多克隆抗體測序。

  二抗是通過使用不同目標動物物種的抗體對宿主動物進行免疫而產生的（圖 2）。例如，通過將兔抗體注射到山羊體內，產生山羊抗兔抗體，從而產生抗兔二抗。二抗生產的常見宿主物種包括山羊、驢和兔子。針對目標物種的混合抗體生成二抗，形成二抗的多克隆混合物，可識別宿主物種的重鏈 (HC) 或輕鏈 (LC)、Fab 和 Fc 區上的表位。減少二抗的交叉反應性可以通過用特定抗體片段免疫宿主來實現，從而產生針對特定區域的二抗，例如僅HC或LC，或Fab片段。從宿主中純化后，抗體標記會與二抗結合。

圖2.二抗的由來

  選擇免疫測定的一抗和二抗

  選擇用于免疫測定的抗體并非易事。選擇正確的抗體時需要考慮幾個因素，包括：

  1、確保一抗的種類與樣品的種類不同，以避免與樣品中的內源免疫球蛋白發生交叉反應。

  2、確保一抗能夠識別樣品物種中的目標蛋白，物種之間的交叉反應性由目標表位的序列同源性決定。

  3、確保一抗已被驗證可用于所需的應用。

  4、選擇針對一抗宿主物種產生的二抗。

  5、選擇與正確標記結合的二抗。例如，對于免疫熒光，確保二抗具有所需波長的綴合熒光染料。

上文為大家介紹了免疫測定一抗和二抗，希望大家對抗體有個充分的認識，同時在實驗過程選擇正確的抗體。科研路上，抗體是您不可或缺的伙伴。 上海通蔚，專注于免疫學試劑研發與生產，為您提供高質量一抗、二抗，助力您的科研事業更上一層樓。