抗體，作為免疫系統(tǒng)中的核心分子，扮演著識別和中和外來入侵者的關鍵角色。它們的多樣性和特異性為生命體提供了強大的保護屏障。在科研和醫(yī)療領域，抗體也已成為不可或缺的工具。而根據(jù)來源和特性的不同，抗體主要分為兩大類：單克隆抗體和多克隆抗體。關于抗體，可以參考上篇《抗體的類型與功能：從結構到應用》

  盡管它們都具有識別抗原的能力，但單克隆和多克隆抗體在產(chǎn)生方式、特異性、應用等方面存在著顯著差異。理解這些差異，對于選擇合適的抗體進行實驗或治療至關重要。今天上海通蔚帶大家了解概念、制備、區(qū)別和應用。

  認識單克隆和多克隆抗體

  單克隆和多克隆抗體制備

  單克隆和多克隆抗體區(qū)別

  單克隆和多克隆抗體應用

  認識單抗和多抗

  多克隆抗體(pAb)是異質混合物，通常由體內不同的B細胞克隆產(chǎn)生。它們可以識別并結合單一抗原的許多不同表位。

  單克隆抗體(mAb)由相同的B細胞產(chǎn)生，這些B細胞是單個親代細胞的克隆。這意味著單克隆抗體具有單價親和力并且僅識別抗原的相同表位。

  單克隆和多克隆抗體制備

  多克隆抗體是通過將免疫原注射到動物體內而產(chǎn)生的。在注射特定抗原以引發(fā)初次免疫反應后，對動物進行二次甚至三次免疫，以產(chǎn)生針對特定抗原的更高滴度的抗體。免疫后，可以直接從血清（已去除凝血蛋白和紅細胞的血液）中獲得多克隆抗體，也可以純化以獲得不含其他血清蛋白的溶液。

  多克隆抗體制備流程

  多抗制備：抗原免疫動物→收集血清→純化獲得多克隆抗體

  與在活體動物中產(chǎn)生的多克隆抗體不同，單克隆抗體是使用組織培養(yǎng)技術離體產(chǎn)生的。該過程首先將所需抗原多次注射到動物（通常是小鼠）中。 一旦動物產(chǎn)生免疫反應，就會從動物的脾臟中分離出B淋巴細胞，并與骨髓瘤細胞系融合，形成永生化B細胞-骨髓瘤雜交瘤。雜交瘤能夠在培養(yǎng)物中持續(xù)生長，同時產(chǎn)生抗體，然后篩選所需的單克隆抗體。

  單克隆抗體制備路程：

  單抗制備：抗原免疫動物→獲得B淋巴細胞→B細胞與骨髓瘤細胞融合→獲得雜交瘤細胞→HAT培養(yǎng)基篩選成功融合的雜交瘤細胞→亞克隆獲得單克隆→挑選最好的克隆進行放大培養(yǎng)→獲得單克隆抗體

圖2 單抗和多抗制備

  單克隆和多克隆抗體區(qū)別

  多克隆和單克隆抗體都有各自的優(yōu)點和缺點，這使得它們可用于不同的應用。

  多克隆抗體

  多克隆抗體的優(yōu)缺點主要由其多表位特異性決定。主要優(yōu)點和缺點如下：

  1、優(yōu)點：

•   生產(chǎn)時間短，成本低。
•   高度穩(wěn)定并能耐受pH值或緩沖液變化。
•   親和力高。由于抗體與多個表位結合，即使表達水平較低，它們也可以幫助放大來自目標蛋白的信號。這使得這些抗體非常適合免疫沉淀和染色質免疫沉淀。
•   耐受抗原的微小變化。與單克隆抗體相比，多克隆抗體對抗原變化（輕微變性、多態(tài)性、糖基化異質性）不太敏感。

  2、缺點：

•   容易出現(xiàn)批次之間的差異。
•   多個表位使得檢查免疫原序列是否存在交叉反應變得很重要。

  單克隆抗體

  單克隆抗體的優(yōu)點和缺點主要基于其對抗原相同表位的高度特異性。主要優(yōu)點和缺點如下：

  1、優(yōu)點：

•   僅高度特異性識別抗原的一個表位
•   永生雜交瘤細胞系能夠產(chǎn)生無限量的抗體
•   實驗間一致性高
•   最小的背景噪音和交叉反應
•   非常適合親和純化

  2、缺點：

•   開發(fā)單克隆抗體需要時間并且需要很高的技術技能。
•   它們可以產(chǎn)生大量的特異性抗體，但可能過于特異性而無法在一系列物種中檢測到。
•   易受表位變化的影響。即使構象的微小變化也可能導致結合能力顯著降低。

  多克隆抗體與單克隆抗體應用

         1、多克隆抗體與單克隆抗體：診斷研究

  單克隆抗體和多克隆抗體哪個更好？這取決于單克隆抗體和多克隆抗體的不同特性。

  多克隆抗體由于能夠識別目標分子的不同表位，因此成為診斷測定和血凝反應中的理想試劑。多克隆抗體的最佳用途是檢測未知抗原。多克隆抗體在免疫測定（例如ELISA、蛋白質印跡、微陣列測定、免疫組織化學、流式細胞術）中用作二抗。它們的作用是結合不同的表位并放大信號，從而實現(xiàn)更好的檢測。

  相比之下，單克隆抗體提供了無限的抗體來源，這些抗體是同質的，一旦表征，其行為是可預測的。單克隆抗體通常用作免疫測定中的一抗，因為它們能夠特異性結合抗原的單個表位。通過臨床應用，使用每種類型抗體的一些缺點已經(jīng)被消除。公司可以純化多克隆抗體，以限制其檢測中的交叉反應程度。單克隆抗體的組合導致捕獲多個表位并擴大其特異性。

圖3 、單克隆抗體與多克隆抗體與抗原結合對比

  2、多克隆抗體與單克隆抗體：治療

  單克隆抗體在臨床環(huán)境中脫穎而出的地方在于它們能夠發(fā)現(xiàn)和靶向特定分子。單克隆抗體的Fc區(qū)最初用標記進行標記，用于發(fā)現(xiàn)細胞表面成分。這項研究促進了單克隆抗體作為藥物的應用。OKT3（也稱為Muromonab）于1985年首次被FDA批準作為器官移植患者預防移植物疾病的特異性移植排斥藥物。從那時起，FDA又批準了另外41種抗體來對抗癌癥、類風濕關節(jié)炎、哮喘和其他疾病。單克隆抗體也被用作載體，將藥物帶到靶細胞（例如癌細胞）。當抗體-藥物偶聯(lián)物遇到靶細胞時，藥物被釋放并發(fā)揮作用。

  相比之下，多克隆抗體由于缺乏特異性和高度交叉反應性，在治療癌細胞方面不如單克隆抗體那么擅長。研究表明，多克隆抗體療法可用于治療某些疾病，并可作為移植患者的免疫抑制劑。

  了解單克隆和多克隆抗體的特性和差異，對于選擇合適的工具至關重要。無論是基礎研究，還是臨床應用，選擇合適的抗體都將為實驗結果和治療效果帶來顯著的提升。

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