ELISA幫你介紹生物素親和素系統操作

生物素親和素(又稱抗生物素)系統(biotin avidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力極強，結合迅速，且極其穩定，生物素系統標記抗體和酶化的標記率高，又不能影響蛋白的活性，使BAS標記技術比常規酶聯免疫、放射免疫及熒光免疫技術有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”，它是鏈霉菌系統培養過程中的引起分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和素一樣，也由4條相同的肽鏈組成。因鏈霉親和素在檢測應用中發生的特異性和非特異性結合的親和素低，所以日漸受重視，已經有取代親和素之勢。

BAS ELISA檢測的方法可分為以下具本內容：
①對于抗原抗體系統，包括免疫細胞化學、ELISA、免疫印跡法等都適用，應用程度范圍廣；
②BAS在溫和條件下可與各類生物大分子如蛋白質、脂多糖等結合，并且這種結合對原生物大分子的生物活性無影響；
③每個親和素分子可與4個生物素分子結合，所以可以偶合更多連接生物素的酶分子，從而大大提高了靈敏度；
④生物素和親和素間親和力強，故二者一旦結合，就極為穩定，不受在ELISA方法中的保溫及多次洗滌影響，而且這種結合反應時間比抗原抗體反應所需時間短；
⑤結果專一性強，非特異性顯色或染色背景極低；
⑥第一抗體稀釋度高，可節約抗體。

生物系親和素系統有以下原理：
1.BA法亦稱LBA法。系將特異性抗體生物素化，將酶分子標記在親和素分子上，生物素的抗體與抗原結合后，再借BAS ELISA的親和力將酶分子聯結到抗原分子上，經酶促反應即可檢出抗原。
2.BAB法亦稱BRAB法。將特異性抗體系統的生物素化和酶標生物素聯成一體。
3.ABC法原理與BAB法基本相同，只是親和素和酶標記生物素需要先按一定比例形成復合物，這種框架結構結合了形成大量的酶分子，當親和素尚未被酶標生物素飽和時，生物素化抗體即可與之結合。

以上便是BAS ELISA的三種基本檢測法。上述方法中，如將第二抗體生物素化，即為間接法。由于間接法增加了一級抗原抗體反應，因而比直接法更敏感，應用范圍更廣。近年來許多學者對上述基本方法進行了改良，有人用親和素抗體或A蛋白作橋聯物。另外還發展了BA ELISA競爭法和抑制法等。

生物素或親和素與抗體分子或標記物結合后，既不影響前者的親和力，也不改變后者的特性。親和素分子的4個活性部位并非都和連接在抗體分子上的生物素殘基結合，剩下的游離部位尚可作為另一種生物素標記蛋白質的受體。這些特點就是BAS免疫標記技術的基礎和原理。