免疫測定是使用抗體來檢測和測量生物樣本（例如血液、尿液或唾液）中的各種物質(zhì)的實驗室測試。它通常用于臨床診斷、藥物發(fā)現(xiàn)和基礎(chǔ)研究，以檢測激素、藥物、蛋白質(zhì)和傳染源等。一些最常用的免疫測定法包括酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)、放射免疫測定法(RIA)、熒光免疫測定法(FIA)和化學(xué)發(fā)光免疫測定法(CLIA)。

圖1、ELISA實驗

  

  免疫分析技術(shù)已廣泛應(yīng)用于藥物分析的各個關(guān)鍵領(lǐng)域，例如疾病診斷、治療藥物監(jiān)測、臨床藥代動力學(xué)研究以及藥物發(fā)現(xiàn)和制藥行業(yè)的生物等效性研究。

  

  ELISA 與其他免疫測定法的比較

  

   一、放射免疫分析（RIA）

  

  放射免疫測定（RIA）是一種使用放射性標記抗原來測量體液中物質(zhì)濃度的技術(shù)。放射性同位素附著在抗原上并與其互補抗體結(jié)合。具有目標抗原的樣品與放射性抗原競爭并取代它。測量樣品的放射性信號，其強度與目標抗原濃度成正比。 RIA 需要含有抗原、互補抗體和放射性標記抗原的樣品。

  

  免疫測定依賴于與一種免疫分析試劑（例如分析物或抗體）連接的可檢測標記，例如放射性同位素或酶。這些標記在免疫測定中的結(jié)合導(dǎo)致了檢測限非常低的高靈敏度檢測系統(tǒng)的開發(fā)。

  

   圖 2 包括 (A) 與一抗孵育的樣品肽。 (B) 然后添加放射性標記的肽。它與樣品肽競爭并取代它。 (C) 二抗與一抗結(jié)合并使其從溶液中沉淀出來。 (D) 離心導(dǎo)致抗體-抗原復(fù)合物形成沉淀。 (F) 典型標準曲線示例。 (G) 尾加壓素-II (UII) 的實際標準曲線，其中結(jié)合的放射性碘量表示為 B/B0，它是每個標準濃度下的結(jié)合量 B 與不存在置換劑時的結(jié)合量 B0 的比率。生物樣本中的分析樣品應(yīng)位于曲線的直線部分。

  

  優(yōu)點：

  

  1、高靈敏度和特異性，可準確檢測和定量復(fù)雜生物樣品中低水平的目標分子

  

  2、適用于多種分析物，包括激素、藥物和傳染源。

  

   缺點：

  

  1、使用需要特殊處理和處置程序的放射性物質(zhì)。

  

  2、專業(yè)設(shè)備和技術(shù)專長會導(dǎo)致更高的成本和時間消耗。

  

  3、被其他更安全、更易于使用的免疫測定技術(shù)所取代。

  

  與ELISA比較

  

  1、RIA 使用放射性標記，而 ELISA 使用酶標記。

  

  2、RIA 更靈敏，但需要特殊處理且更昂貴，而 ELISA 更安全、更快速且更具成本效益。

  

  3、RIA 更適合檢測復(fù)雜生物液體中的低水平抗原或抗體，而 ELISA 更適合快速檢測大量樣品。

  

  4、檢測方法的選擇取決于實驗的具體需求，例如靈敏度、成本和安全性。

  

  二、熒光免疫分析 (FIA)

  

  FIA 是一種使用熒光化合物來檢測和測量不同化合物的技術(shù)。與其他方法相比，它具有高度靈敏和快速的特點，使其成為體外診斷領(lǐng)域的熱門選擇。

  

  在 FIA 中，熒光探針用于標記抗體，抗體在紫外線下發(fā)光以檢測特定的抗原抗體結(jié)合。然后分離抗原-抗體復(fù)合物并測量熒光強度。

  

  進行了一項研究，使用三種競爭性測定法降低食品中酪蛋白的檢測限：直接和間接 TR-FIA 以及 ELISA。兩種 TR-FIA 的靈敏度均遠低于 ELISA。然而，所有三種測定方法都可以對食品中的酪蛋白進行 1-1.5 mg kg?1的定量，為更嚴格的驗證和協(xié)作測試提供了基礎(chǔ)。 TR-FIA 方法沒有比 ELISA 提供任何改進。

  

   優(yōu)點：

  

  1、快速且高度靈敏地檢測和定量化合物

  

  2、使用特異且高靈敏度的熒光化合物作為檢測試劑

  

  3、可用于不同的環(huán)境，包括體外診斷

  

  缺點：

  

  1、需要專門的熒光檢測設(shè)備

  

  2、與其他方法相比，檢測動態(tài)范圍有限

  

  3、樣品基質(zhì)和自發(fā)熒光可能會產(chǎn)生干擾。

  

  與ELISA比較

  

  使用 TRFIA（時間分辨熒光免疫分析）和Eu3+ 螯合物標記的單克隆抗體檢測環(huán)境水中的痕量磺胺類藥物。該方法具有低檢測限和高選擇性，并且能夠耐受pH、鹽度和其他物質(zhì)存在的變化。 TRFIA 具有成本效益、樣品通量高、無需預(yù)處理即可使用。研究表明，TRFIA 是一種很有前景的環(huán)境水中磺胺類藥物常規(guī)篩查方法，與現(xiàn)有方法相比具有優(yōu)勢。

  

  三、化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA)

  

  CLIA 使用化學(xué)反應(yīng)來產(chǎn)生光并檢測目標分子的存在。將特定抗原或抗體固定在固體支持物上，然后添加化學(xué)發(fā)光底物以及與目標分子結(jié)合的二抗。

  

  基于磁珠的 CLIA 是一種變體，它使用涂有特定抗原或抗體的磁珠，這些磁珠通過磁性納米粒子進行功能化，可以有效地將目標分子從樣品中分離出來。

  

  用于檢測寨卡病毒的磁驅(qū)動化學(xué)發(fā)光檢測使用帶有針對該病毒的特異性抗體功能化的磁珠，將其置于磁場中以提高檢測的靈敏度。

  

  化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA) 的優(yōu)點包括：

  

  1、高靈敏度和特異性：CLIA可以檢測極低濃度的目標分子，假陽性和假陰性率低。

  

  2、寬動態(tài)范圍：CLIA 可以測量目標分子的各種濃度，從非常低到非常高。

  

  3、靈活性：CLIA可用于檢測多種不同的靶分子，包括蛋白質(zhì)、核酸和小分子。

  

  4、自動化：CLIA 可以輕松實現(xiàn)自動化，使其成為一種方便高效的高通量分析技術(shù)。

  

  5、穩(wěn)定性：與其他免疫測定技術(shù)相比，CLIA 產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號穩(wěn)定，可以在更長的時間內(nèi)進行測量。

  

   化學(xué)發(fā)光免疫分析 (CLIA) 的缺點包括：

  

  1、成本：CLIA 試劑和儀器可能很昂貴，這可能會限制它們在某些應(yīng)用中的使用。

  

  2、復(fù)雜性：CLIA 需要專門的設(shè)備和專業(yè)知識，這使得在一些實驗室中難以實施。

  

  與ELISA比較

  

  這兩種免疫測定法已證明其分析具有一致性，但定量結(jié)果存在差異，這可能歸因于使用不同的標準校準品。盡管 CLIA 測試顯示所獲得的值波動較大，但它是有益的，因為它是一個自動化過程，并且等待時間短。因此，兩種免疫測定可以互換使用，以精確測定樣品中的抗 HBs 水平。

  

   結(jié)論

  

  總之，ELISA 是一種經(jīng)濟有效且廣泛使用的方法，但在敏感性和特異性方面可能存在局限性。 RIA 靈敏度高，但價格較高，并且由于使用放射性同位素而帶來安全問題。 CLIA 高度靈敏、特異、自動化且周轉(zhuǎn)時間短，使其成為臨床實驗室的熱門選擇。