1. ELISA檢測試劑盒待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 

2. 酶標板置4℃，包被過夜。

3. 洗板：吸干孔內反應液，用洗滌液過洗一遍將洗滌液注滿板孔后，即甩去，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。

4. 陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。 

5. 酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 

6. 洗板，同4。 

7. 每孔加1:5000稀釋的hrp-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 

8. 酶標板置37℃培養箱的濕盒內，孵育60min。 

9. 洗板，同4。 

10. 每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。 

11. 每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應。 

12. 分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，終測得的od值為兩者之差w1-w2，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

13. ELISA檢測試劑盒數據處理：在得出標本s和陰性對照n的 od值后，計算s/n值。s/n***2.1為陽性判定標準。