了解ELISA實驗原理及步驟有助于科研人員準確、高效地進行實驗設計、操作與結果分析，提升科研能力。今天，上海通蔚生物從ELISA實驗原理及步驟出發來講一講，有助于大家對ELISA實驗有全面了解。

  ELISA實驗原理

  酶聯免疫吸附實驗，或稱ELISA，是一種常用的血清學檢測方式，接下來這篇文章為大家詳細介紹其工作原理，請拿好小板凳來做筆記。

  ELISA血清學檢測法通常是在多孔微量板中進行，這樣可以很方便的進行血清的稀釋和檢測。在進行檢測前，先用目標抗原包被多孔板的每個孔。對于商業化的檢測，制造商會把這個步驟先做好。

  開始檢測時，我們會在每個孔中加入稀釋過的患者血清，如果病人血清中有相應的抗體存在，它們會與固定在孔底的抗原結合。接著，用緩沖液沖洗出未和目標抗原結合的抗體。然后，加入含有動物抗體的溶液（注；此動物抗體是能夠抗人體的抗體的）。這第二種抗體（既動物抗體）上共價結合了一個酶。

  再次清洗這些孔，這次是為了出去未結合的沒標記的抗體。最后，加入顯色溶液，這樣溶液含有一種被酶催化顯示的底物。底物與第二種抗體上的酶相互作用，可以使溶液呈現明顯顏色。因著不同濃度的目標抗體存在，孔槽溶液會產生不同程度的顏色變化。這樣的顏色變化，可以通過肉眼觀察和儀器定量讀取每個孔中的特定抗體的顯色結果。血清濃度隨著稀釋而降低，能夠和抗體產生反應的抗體濃度也因而隨之下降。

  所以顏色變化也因而由濃變淡。能出現顯色反應的最高稀釋倍數就是所測樣品的效價。

  ELISA實驗步驟

  在開始做ELISA實驗之前，我們先理一下需要哪些準備。需要準備包括：

  實驗用品：

  藥品：稀釋液、酶標二抗、底物、陽性血清、陰性血清、終止液

  器材：抗原板、稀釋版、待檢血清、加樣槽、移液槍、加樣儀、酶標儀、恒溫箱

  在做實驗時候，我們要準備一個實驗本，在做實驗之前把這次實驗步驟理順，然后根據我們相應的實驗所反饋的結果要實時的登記在我們實驗記錄本上面。接下來給大家詳細說下實驗步驟：

  步驟一：首先我們要根據我們的血清量，合理的吸取相應的稀釋液的量加入我們的稀釋板里面。

  我們用多道移液槍到我們稀釋板里面（調到適當的量程）根據我們反應要求的倍數進行稀釋，用排槍將稀釋液吸入板中（注：在吸入過程要保證排槍的槍頭里面的稀釋液處于同一水平）。

  然后，在使用微量移液槍調取我們所需要的量程，按順序吸取適量的待檢測血清，加入稀釋板的稀釋液中。依次類推，將所有的待檢血清依次加入對應的稀釋板中。

  加入完后，最后加入陽性血清和陰性血清。使用排槍將加入好的血清和稀釋液混勻過后對比加入抗原板中，將加入完抗原板用密封袋密封后放入37度的恒溫箱中，孵育40分鐘（注：不是所有孵育時間都是40分鐘，可以根據說明書進行孵育），待40分鐘孵育完畢后，將抗原板取出，將抗原板內稀釋液倒掉，然后用加樣儀加入洗滌液，按照使用要求，將抗原板洗滌3-4次。每次加入洗滌液之后，都要將洗滌液倒出，然后在加入洗滌液，依次類推，當第四次加入完畢后，將板內洗滌液在書本或者桌布上面進行相對的拍干（注：板子相對拍干過后與下一次的試劑加入的間隔時間不易太久）。

  步驟二：加入酶標二抗。用拍槍版將酶標二抗加入抗原板中，加入完畢后，用密封袋密封過后放入37度恒溫箱中孵育40分鐘。孵育完畢后，將抗原板拿出倒掉酶標二抗，然后加入洗滌液，將抗原板洗滌3-4次。倒掉過后拍干。

  步驟三：加入底物（注意：底物一般為避光試劑，在加熱過程應保證整個過程是快速的）。將底物加入抗原板中，加入完畢后，直接放入37度恒溫箱中進行孵育，此過程不需要密封袋進行密封。將底物拿出，底物的孵育時間一般為10-15分鐘。

  步驟四：加入終止液。加入完后，可以用酶標儀讀數，一般要將數據導入U盤進行整理。

  上述為大家整理了elisa實驗原理及步驟，大家可以作為參考。大家在做elisa實驗時候可以結合自己的說明書進行。如果您還有疑問，可以在線咨詢我。

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