原代細胞是從組織機體中分離后并且在體外首次培養的細胞，在體外特定的培養條件下進行生長和繁殖，當細胞增值到一定密度（通常在70-90%匯合度）。為了維持細胞生長和狀態活力，需要將細胞轉移到含有新鮮生長的培養基新容器中進行傳代培養，也稱作繼代培養。相關閱讀：《什么是原代細胞》

  原代細胞培養步驟

  1、組織收集和處理

  在無菌條件下，從動物或人體組織分離樣本。在收集和處理樣本可以采用消化酶、機械切割或抗體磁珠等方法，將組織分成單個細胞。組織分散成單個細胞后，需要進行洗滌、過濾（例如使用細胞篩）等步驟去除組織碎片和酶。

  2、細胞分離

  根據目標細胞的特性，選擇合適的細胞分離方法。常用的方法包括密度梯度離心、熒光激活細胞分選(FACS)、磁性激活細胞分選(MACS)等。例如，可以使用密度梯度離心法根據細胞密度的差異分離不同類型的細胞。篩選、沉淀和離心等步驟通常作為這些方法的輔助步驟，用于去除雜質、收集細胞或更換緩沖液等。

  3、培養基的選擇和準備

  根據分離出的細胞類型和實驗目的，選擇合適的培養基。不同的細胞類型對培養基的營養成分、生長因子和其他添加劑的需求不同。查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議，選擇適合目標細胞的培養基配方。常用的基礎培養基包括DMEM、RPMI-1640、Ham'sF-12等，但通常需要根據具體細胞類型進行調整。

  4、細胞培養和傳代

  接下來對細胞進行培養和傳代。將分離純化后的細胞重懸于到合適的培養基中，然后接種到預先用細胞外基質（例如膠原蛋白、纖連蛋白、明膠等）包被的培養皿或培養瓶中，提供適當的溫度、濕度和CO2濃度等條件。原代細胞通常生長較慢且有限，當細胞達到一定匯合度（通常為70-90%）時，需要進行傳代。

  原代細胞培養注意事項

  1、保持無菌條件

  細胞培養需要在無菌環境下進行，以防止細胞被細菌和真菌污染。在進行原代細胞培養之前，必須確保實驗環境和所操作工具、培養皿都處于嚴格的無菌狀態。使用消毒劑清潔操作區域，并穿戴合適個人防護設備，如穿戴無菌手套等。

  2、選擇合適的培養基

  根據細胞類型不同選擇合適的培養基，查閱文獻或參考ATCC等細胞庫的建議，選擇適合目標細胞的培養基配方。同時也要確保培養基和補充物質配方適合目標細胞類型，并檢查過期日期和存儲條件。

  3、細胞密度控制

  細胞密度對細胞生長和功能有重要影響。細胞密度過高會導致細胞過度接觸和競爭，影響細胞生長；細胞密度過低會導致細胞生長緩慢。因此，根據細胞類型和實驗要求控制細胞密度，通常通過細胞計數儀或顯微鏡進行細胞計數。

  4、注意細菌污染

  在細胞培養過程，需要定期檢查細胞是否受到細菌、真菌和病毒等污染。可以通過細菌培養、真菌培養和PCR等方法進行檢測。如發現細菌和真菌污染，需立即采取措施，例如更換培養器皿，使用抗生素或抗真菌藥物等。同時，也要注意實驗室清潔和消毒，以預防細胞污染的發生。

  5、實驗記錄

  準確記錄培養細胞的信息，包括來源、處理方法、傳代次數及細胞密度等。這些記錄對于實驗結果的解釋和后續研究非常重要。

  上述是對原代細胞培養有哪些步驟進行介紹，僅供參考！細節決定成敗，細菌、真菌、支原體、黑膠蟲，個個都是細胞殺手，在進行細胞培養之前要了解注意事項，爭取把實驗一次性做好。