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ELISA技術支持

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酶聯免疫吸附實驗:ELISA 樣本處理

發布時間:2024-08-16     發布作者:上海通蔚生物

  在ELISA中,記錄對于跟蹤驗證步驟和確保整個過程的一致性至關重要。正確標記樣品和試劑對于避免混淆至關重要。使用經過校準的移液器進行精確測量有助于最大限度地減少ELISA測定中常見的變異性和移液錯誤。優化試劑濃度并遵守方案可提高測定性能和可重復性。例如,保持適當的孵育時間和室溫條件對于獲得可靠的結果是必要的。

  適當的樣本制備非常重要,因為它會影響ELISA測試的準確性和可靠性。此過程包括減少干擾、保持樣本完整以及為測試創造最佳條件的步驟。為了安全起見,根據材料的傳染性程度,需要不同級別的防護。基本的防護服有助于防止樣本污染和錯誤結果。必備的安全裝備包括實驗室工作服、手套、護目鏡,有時還包括通風櫥。

樣品的存儲:

1.避免污染:遵循制造商的指導來存儲樣品。

2.標簽和密封: 確保樣品正確標記和密封,以防止干燥或蒸發。

3.及時分析:盡快分析樣本以獲得準確的結果。

樣品采集:

1.遵守規則: 遵守樣本采集的法律準則。

2.告知客戶: 讓客戶知道需要多少樣品。

3.反映狀況:確保結果準確反映收到的樣本的狀況。

樣品制備:

1.遵循說明:遵循測試套件的說明來混合和提取分析物。

2.使用適當的設備: 確保所有設備合適且維護良好。

3.時間:分析前準備樣品或按指示儲存。

使用冷凍樣品:

1.解凍: 根據分析物的穩定性,在 4°C 或室溫下完全解凍樣品。

2.混合:徹底混合液體樣品,不要產生泡沫。

3.避免反復冷凍: 將樣品分裝于-20°C 下保存,以避免多次凍融循環并保持樣品質量。

  資源優化

  為了提高效率,有效管理分析板、洗滌緩沖液和試劑等資源至關重要。使用可靠的洗板機并遵守洗滌步驟的規程可以顯著減少背景信號并提高靈敏度。定期進行數據分析可確保分析性能符合預期標準,尤其是在處理低分析物濃度時。

細胞培養上清液

1.離心: 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋轉培養基 10 分鐘。

2.儲存: 分裝并將上清液儲存于 -80°C。避免反復凍融。

細胞提取物

1.準備:將組織培養板放在冰上,并用冰冷的 PBS 清洗細胞。

2.提取:每 100 毫米平板添加 0.5 毫升提取緩沖液,刮下細胞,收集在冷卻的試管中,短暫渦旋,并在冰上孵育 15-30 分鐘。

3.離心: 4°C 下以 13,000 rpm 旋轉 10 分鐘。

4.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

條件培養基:

1.培養細胞:使用含血清的培養基直至細胞達到所需的匯合度。

2.準備培養基: 用溫熱的 PBS 清洗,添加無血清培養基,孵育 1-2 天。

3.離心: 4°C 下以 1,500 rpm 的速度旋轉培養基 10 分鐘。

4.儲存:分裝并將上清液儲存于 -80°C。避免反復凍融。

牛奶、尿液、唾液:

1.離心: 4°C 下以 10,000 xg 旋轉 2 分鐘。

2.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

等離子體:

1.收集血液: 使用抗凝管,在 4°C 下以 3,000 rpm 離心 10 分鐘。

2.儲存:分裝上清液(血漿)并儲存在 -80°C 下。避免反復凍融。

血清:

1.收集血液:使用未經處理的試管,在室溫下孵育 20 分鐘。

2.離心: 4°C 下以 3,000 rpm 旋轉 10 分鐘。

3.儲存:分裝上清液(血清)并儲存在 -80°C 下。避免反復凍融。

組織提取物:

1.解剖組織: 在冰上操作,在液氮中快速冷凍。

2.提取: ~5 mg 組織添加~300 μL 提取緩沖液,均質化,然后沖洗刀片。

3.攪拌:在 4°C 下混合 2 小時,然后在 4°C 下以 13,000 rpm 離心 20 分鐘。

4.儲存:分裝上清液并儲存于 -80°C。避免反復凍融。

一般建議:

1.蛋白質濃度: 目標濃度為1-2 mg/mL

2.稀釋: 用結合緩沖液將血清、血漿、細胞和組織提取物稀釋 50%

3.離心解凍樣品:使用前在 4°C 下以 10,000 rpm 旋轉 5 分鐘。

  試劑制備和質量控制:正確的試劑制備和驗證是實現可靠檢測性能的關鍵。一致的試劑標簽和控制以及跟蹤使用和存儲有助于提高ELISA程序的整體可靠性。實施嚴格的質量控制可確保準確測量分析物濃度并確保結果可重復。t使用前在4°C下以10,000rpm轉速旋轉5分鐘。

存儲期限限制:

2-8°C:適合最多5天。

-20°C:適合長達6個月。

-80°C:可保存長達 2

液氮:適合通過適當的方法無限期保存。

避免反復凍融循環:

1.將樣品分成更小的等份以減少多次凍融循環的需要。

2.15-25°C水浴中快速解凍樣品并立即使用。

3.如果要重新冷凍,請在解凍后立即進行,以盡量減少樣品的降解。

套件的存儲:

1.儲存于 2-8°C 干燥處;避免冷凍組件。

2.遵守標簽上的有效期。

3.防止試劑盒凍結以避免損壞和無效結果。

先進先出:

1.優先使用有效期最短的套件。

2.請注意工具盒上的首次使用日期,以防止混淆。

預熱:

1.使用前將所有試劑恢復至室溫(20-25°C)。

2.使用后應立即將組件放回儲存條件。

未使用組件的存儲:

1.將未使用的微量滴定板存放在裝有干燥劑的可重新密封的袋中。

2.將所有組件直立并安全關閉地存放。

  樣品處理

  在Elisa樣本處理中,離心用于去除細胞成分和碎片,這對于獲得干凈的上清液非常重要。
  通過深度或膜過濾方法去除殘留顆粒,進一步清潔樣品。此步驟可確保樣品不含任何可能影響測試結果的污染物。
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