ELISA，作為一種廣泛應用于生物醫學研究的免疫測定方法，其結果的準確性極易受到污染的影響。污染不僅會導致假陽性或假陰性結果，還會浪費寶貴的試劑和時間，甚至誤導研究方向。本文將詳細分析ELISA污染的可能原因，并提供相應的預防和解決措施，以幫助研究人員提高實驗結果的可靠性。

ELISA實驗污染的可能原因

ELISA實驗中污染可能導致假陽性、假陰性或高背景等問題，常見原因可歸納為以下幾類：

試劑相關污染

1、試劑污染

• 微量反應板或試劑（如酶標抗體、顯色劑）制備過程中被細菌、灰塵或交叉試劑污染。
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• 顯色劑（如TMB）提前接觸HRP酶，導致底物變質或非特異性顯色。
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• 試劑保存不當（如未避光、未冷藏），或過期失效。

2、試劑交叉干擾

• 補體（如C1q）未被滅活，可能非特異性結合抗體導致假陽性。
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• 試劑盒組分混用（如不同指標的標準品、酶標板混用）。

操作步驟污染

1、加樣污染

• 加樣時未更換槍頭，導致樣本或試劑交叉污染。
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• 全自動加樣設備使用重復性鋼針未徹底清洗，殘留強陽性樣本拖帶污染其他孔（如HIV檢測中探針殘留）。

2、洗滌不充分

• 洗滌次數不足或洗液殘留未拍干，導致非特異性結合物質殘留。
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• 洗板浸泡時間過短，或洗液稀釋比例錯誤。

3、孵育條件不當

• 溫度過高（如恒溫箱溫度超過37.5℃）或時間過長，加速非特異性反應。
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• 顯色步驟未避光，導致顯色劑異常氧化

樣本處理問題

1、標本本身污染

• 樣本溶血（紅細胞釋放過氧化物酶干擾HRP系統）或細菌污染。
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• 血清/血漿中脂質過高、膽紅素、血紅蛋白等成分干擾檢測。

2、標本保存不當

• 長期冷藏導致IgG聚合或多聚體形成（如AFP二聚體），增加背景值。
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• 反復凍融未充分混勻，導致局部蛋白濃度異常。

設備及環境因素

• 儀器參數設置錯誤
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• 酶標儀光密度范圍設置過寬（如超過OD3.5），導致背景信號誤讀。
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• 增益值過高，放大噪聲信號。

實驗環境干擾

• 空氣中灰塵或揮發性物質污染板孔。
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• 操作臺面或加樣槽未清潔，殘留污染物。

其他干擾因素

• 交叉反應物質：如類地高辛、類AFP等與靶抗原有交叉反應的物質，尤其在單克隆抗體檢測中易引發假陽性。
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• 纖維蛋白殘留：血液未完全凝固即離心，殘留纖維蛋白原形成假陽性信號。

了解ELISA實驗常見的污染原因，并采取相應的預防和解決措施，才能有效避免假陽性或假陰性結果，最終提高實驗效率和數據可靠性。