常見問題

• 使用不匹配的吸頭和移液器。
• 不戴手套直接處理吸頭。
• 多通道移液器吸頭連接不均勻。

解決方案

• 務必使用移液器制造商推薦的吸頭，尤其是對于小容量移液器。
• 處理吸頭時務必佩戴塑料手套以防止污染。

減少錯誤

• 確保所有吸頭均牢固地安裝在多通道移液器上。
• 目視檢查體積以盡量減少移液錯誤。
• 徹底清洗后才能回收吸頭，并及時丟棄任何損壞的吸頭，尤其是與酶結合物一起使用的吸頭。

熟練使用

• 適當的移液技術培訓對于保持 ELISA 檢測的準確性和一致性至關重要，從而獲得可靠的結果。

強烈或長時間的結合反應

• 確保按照說明書的稀釋度使用結合物，并用終止緩沖液及時終止反應。

過舊的底物或終止溶液

• 使用新鮮的底物和終止液。終止液應清澈，而不是黃色。

反應未停止

• 停止反應以防止繼續顯色。

延遲讀板

• 加入終止液后立即讀板，以避免進一步顯色。

受污染的玻璃器皿或塑料

• 使用干凈、消毒過的玻璃器皿和新鮮的塑料以防止污染。

孵化溫度不正確

• 在正確的溫度下進行孵化，并驗證孵化器是否正確設置并正常運行。

非特異性抗體結合

• 包括使用合適封閉緩沖液的封閉步驟，例如來自與二抗相同物種的 5-10% 血清或牛血清。確保孔經過預處理以防止非特異性附著。

清洗或阻塞不充分

• 增加洗滌次數和持續時間。使用 BSA、酪蛋白或明膠等蛋白質阻斷劑來防止非特異性結合。在洗滌緩沖液中添加 Tween-20 等洗滌劑。

高抗體濃度

• 降低一抗或二抗的濃度。如有必要，進行滴定。

底物溶液的過早制備

• 將底物溶液立即混合，然后加入到板中。

受污染的儲液器、板密封劑、移液器吸頭或緩沖液

• 每一步均使用干凈的器皿并準備新鮮緩沖液，以避免 HRP 污染。

試劑處理

• 按按照說明書以正確的順序添加試劑。
• 嚴格按照試劑說明書的要求進行稀釋并根據需要重復實驗。

抗體濃度

• 如果抗體濃度太低，則增加一抗或二抗濃度。
• 為獲得更佳效果，請在 4°C 下孵育過夜。考慮使用抗體濃縮試劑盒。

抗體相容性

• 確保一抗和二抗兼容且物種匹配。
• 對于粘附性較差的情況，請使用經 ELISA 驗證的板并將涂層時間延長至 4°C 過夜。

夾心 ELISA

• 確認捕獲和檢測抗體針對不同的表位。
• 如果需要，請使用不同的抗體對或考慮其他 ELISA 類型。

標準與樣品

• 確保標準品正確制備。如果標準品過期或降解，請使用新的小瓶。
• 如果樣本不在可檢測范圍內，則進行連續稀釋并加入樣本以檢查是否存在干擾。

緩沖區注意事項

• 確保緩沖液不含疊氮化物或充分清洗以避免抑制 HRP 活性。

確定問題

• 樣本中可能不含有分析物，或者分析物的含量低于可檢測水平。
• 分析物濃度可能高于最高標準點。

低分析物濃度的解決方案

• 使用更高的樣本量來提高檢測效果。
• 尋求適合的協議修改的建議。

高分析物濃度的解決方案

• 稀釋樣品并重新分析，以使其處于檢測的范圍內。