夾心法

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般之操作步驟為:

將具有專(zhuān)一性之抗體固著（coating）于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體

加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一之一次抗體，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酵素之二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)

洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

間接法

間接法常用于檢測(cè)抗體，一般之操作步驟為：

將已知之抗原固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余之抗原。

加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)之一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)。

洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酵素之二次抗體，與待測(cè)之一次抗體鍵結(jié)。

洗去多余未鍵結(jié)二次抗體，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。

競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：

將具有專(zhuān)一性之抗體固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體

加入待測(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

加入帶有酵素之抗原，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗體鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

洗去檢體與帶有酵素之抗原，加入酵素受質(zhì)使酵素呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少，顯色也就越淺。

當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。