產(chǎn)品及特點(diǎn)
本產(chǎn)品是基于熒光探針檢測的即用型RT-PCR試劑盒，可以對靶RNA分子進(jìn)行實時定量RT-PCR分析（quantitative RT-PCR、qRT-PCR）。產(chǎn)品含有經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液組分、逆轉(zhuǎn)錄酶、熱啟動Taq DNA聚合酶、Taq DNA穩(wěn)定劑、dNTPs、MgCl2和穩(wěn)定劑等所有實時定量RT-PCR所需要的成分，用戶只需加入RNA模板、引物和探針即可進(jìn)行探針法實時定量RT-PCR反應(yīng)，具有廣泛的用途。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 以2×Mix提供，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物、探針和ROX染料（取決于qPCR儀器）即可以進(jìn)行探針法實時定量RT-PCR實驗，非常方便快捷，降低了操作誤差。
2. 各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化，反應(yīng)的靈敏度高，特異性強(qiáng)。靈敏度最高時可以達(dá)到50拷貝/反應(yīng)（跟模板質(zhì)量，引物設(shè)計等相關(guān)）。
3. 既可用于TaqMan探針qRT-PCR，也可以是分子信標(biāo)（molecular beacon）的qRT-PCR。
4. 靈敏度和專一性比染料法熒光定量RT-PCR更高。
5. 可用于基因表達(dá)分析、SNP分析、拷貝數(shù)分析等實驗。也可以用于定性檢。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，1 mL足夠100次20 μL體系的探針法qRT-PCR反應(yīng)。
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成分
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規(guī)格
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包裝
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探針法qRT-PCR緩沖液
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500μL
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0.5mL藍(lán)蓋管
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探針法qRT-PCR酶混合液
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100μL
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0.5mL紅蓋管
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使用手冊
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1份
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1份
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
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使用方法
如果有N個樣品并且做定量分析，最好設(shè)置N+7個反應(yīng)，多出的7個中，6個是做標(biāo)準(zhǔn)曲線的陽性對照，一個是陰性對照（NC）。在N+7個PCR管中，加入下列成分。如果是做定性分析，則6個做標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品縮減成一個陽性對照（PC），用戶自己需要根據(jù)下表進(jìn)行適當(dāng)修改（把6個標(biāo)曲反應(yīng)改成1個陽性對照反應(yīng)）。
注，下列信息僅供參考，具體以qPCR儀器的使用手冊為準(zhǔn)
1、不需要ROX的機(jī)型：AgilentMX3000和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System等型號的熒光PCR儀器不需要加ROX染料，但加入的話也不會影響整個PCR分析
2、需要使用ROXI的機(jī)型：ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One、Step One Plus。
3、需要使用ROXII的機(jī)型：ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。
如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性。一般情況下，陰性對照Ct大于或等于40（閾值需要以陰性對照的Ct值確定，此處為便于敘述以40為例，具體情況很可能閾值不一樣）。陽性2. 對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于30。對待測樣品，如果其Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實驗的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽性。
自備試劑
RNA模板、引物、TaqMan探針、超純水
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
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幫助
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