產品及特點

單純皰疹是一種由單純皰疹病毒（Herpes Simplex Virus、HSV)所致的病毒性皮膚病，中醫(yī)稱為熱瘡。HSV能引起人類多種疾病，如齦口炎、角膜結膜炎、腦炎以及生殖系統(tǒng)感染和新生兒的感染。在感染宿主后，常在神經細胞中建立潛伏感染，激活后又會出現(xiàn)無癥狀的排毒，在人群中維持傳播鏈，周而復始的循環(huán)。單純皰疹病毒1型（Herpes Simplex Virus Type 1、HSV-1)是單純皰疹病毒的一類，可通過呼吸道、皮膚接觸等傳染，并且是口腔疾病的主要病原體。本產品就是以探針法熒光定量 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測單純皰疹病毒1型的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)單純皰疹病毒1型高度保守區(qū)設計，不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。

6. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

7. 本產品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	規(guī)格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色蓋
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
超純水	1mL	1.5mL藍蓋管
單純皰疹病毒1型探針法qPCR引物-探針干粉	50次	1.5mL棕色管
單純皰疹病毒1型探針法qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊	1份	無
本產品采用五孔盒包裝
注意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，好用帶芯槍頭，下同。

3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備

7. 如果有N個樣品，好設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒DNAout或免提取核酸釋放劑。

Probe qPCR反應20 μL體系，在樣品制備室進行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理

1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。

2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于42。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于42，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于42，則為陰性。如果Ct小于42則為陽性。

自備試劑
樣品DNA

運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年

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021-54845833/15800441009

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

農殘檢測試劑盒

細胞庫

基礎培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細胞

細胞專用培養(yǎng)基

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