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水痘-帶狀皰疹病毒探針法qPCR試劑盒
使用方法
稀釋標準曲線樣品（以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
產品及特點
水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-Zoster Virus，VZV）屬人類皰疹病毒α亞科，又稱人類皰疹病毒3型（Human Herpes Virus Typs 3，HHV-3）是水痘和帶狀皰疹的病原體，其基因組為線性雙鏈DNA分子，長約124884bp。是一種兒童初次感染引起水痘，恢復后病毒潛伏在體內，少數病人在成人后病毒再發而引起帶狀皰疹的病毒。水痘是具有高度傳染性的兒童常見疾病，多發于2～6歲，傳染源主要是患者，患者急性期水痘內容物及呼吸道分泌物內均含有病毒。曾患過水痘的病人引起帶狀皰疹后，初期局部皮膚有異常感，搔癢、疼痛，進而出現紅疹、皰疹，串連成帶狀，病程約3周左右，少數可達數月之久，還有可能出現腦脊髓炎和眼結膜炎等并發癥。該病毒對人體健康有長期潛在危害，因此水痘-帶狀皰疹病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的水痘-帶狀皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
水痘-帶狀皰疹病毒（Varicella-Zoster Virus，VZV）屬人類皰疹病毒α亞科，又稱人類皰疹病毒3型（Human Herpes Virus Typs 3，HHV-3）是水痘和帶狀皰疹的病原體，其基因組為線性雙鏈DNA分子，長約124884bp。是一種兒童初次感染引起水痘，恢復后病毒潛伏在體內，少數病人在成人后病毒再發而引起帶狀皰疹的病毒。水痘是具有高度傳染性的兒童常見疾病，多發于2～6歲，傳染源主要是患者，患者急性期水痘內容物及呼吸道分泌物內均含有病毒。曾患過水痘的病人引起帶狀皰疹后，初期局部皮膚有異常感，搔癢、疼痛，進而出現紅疹、皰疹，串連成帶狀，病程約3周左右，少數可達數月之久，還有可能出現腦脊髓炎和眼結膜炎等并發癥。該病毒對人體健康有長期潛在危害，因此水痘-帶狀皰疹病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的水痘-帶狀皰疹病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據水痘-帶狀皰疹病毒DNA高度保守區設計，不會跟其他細菌的DNA發生交叉反應。
5. 涵蓋性廣，尤其是能檢查危害人類健康的幾種水痘-帶狀皰疹病毒。
6. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5
個數量級。
7. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
8. 本產品只能用于科研。
規格及成分
規格及成分
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成分 |
規格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
500μL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL紅蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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水痘-帶狀皰疹病毒qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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水痘-帶狀皰疹病毒qPCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標準曲線樣品（以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，
下同）。
3. 在6號管中加入5μL1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。。
4. 換槍頭，在5號管中加入5μL1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所
得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5μL1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR 反應20μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數據處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數據，需要重新樣本制備，重新進行PCR擴增或跟廠家聯系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結果為陽性，說明環境污染，則整個實驗無效，不需要分析數據，需要跟廠家聯系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常，則實驗有效，可以進入后續分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照Ct必須等于或者大于35，或者沒有Ct值。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于35。對待測樣品，如果其Ct小于35則為陽性。如果在大于或等于35則為陰性。
自備試劑
超純水，樣品DNA
超純水，樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
