支原體屬(Mycoplasma spp.)是支原體目、支原體科的1屬,有近百個種。它們是一類沒有細胞壁、高度多形性、能通過濾菌器、可用人工培養基培養增殖的原核細胞型微生物,大小為 0.1~0.3 微米。由于能形成絲狀與分枝形狀,故稱為支原體。支原體廣泛存在于人和動物體內,大多不致病。但是它們常常污染培養細胞,污染發生率高達到50%左右,故培養細胞的支原體污染已經成為一個世界性的難題。由于當細胞(特別是傳代細胞)被支原體污染后,細胞內的DNA、RNA及蛋白表達發生改變,而細胞的生長率一般并未發生顯著的影響,故難以察覺,因此在早期快速診斷具有重要的意思。歐盟藥典已經要求對使用培養細胞流程生產的生物工程制品進行 9 種支原體的核酸檢測。為此本公司開發了涵蓋歐盟所要求的9種支原體檢測試劑盒,它具有下列特點:
規格及成分
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成分 |
規格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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支原體通用qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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支原體通用qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
1份 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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注 意: 引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA
低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
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