核型多角體病毒(Nuclear Polyhedrosis Virus,NPV)是一種專一性昆蟲病毒,屬于桿狀病毒科,具有雙鏈環(huán)狀DNA基因組,大小約80-180 kb。它們主要感染鱗翅目昆蟲,通過口服途徑進(jìn)入昆蟲體內(nèi),在中腸細(xì)胞內(nèi)繁殖后擴(kuò)散至全身,形成多角體導(dǎo)致宿主死亡。感染該病毒的昆蟲幼蟲會(huì)表現(xiàn)出食欲減退、行動(dòng)遲緩等癥狀。核型多角體病毒對(duì)農(nóng)業(yè)害蟲控制有重要意義,因其高度宿主特異性被廣泛用作生物農(nóng)藥控制害蟲種群,如控制舞毒蛾、棉鈴蟲等,因此快速檢測核型多角體病毒具有重要的意義。為此,本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了核型多角體病毒的檢測試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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核型多角體病毒qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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核型多角體病毒qPCR陽性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA,超純水,核酸純化試劑盒
低溫運(yùn)輸,-20℃保存,有效期1年
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