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品質保證 · 通蔚試劑

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產(chǎn)品中心

  • 豬呼腸孤病毒探針法qRT-PCR試劑盒

    規(guī)格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10450
    • 應用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 1年
    • 規(guī)格 :50T
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產(chǎn)品及特點

仔豬病毒性腹瀉一直是困擾養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的重要因素。豬呼腸孤病毒 (Porcine reovirus)屬呼腸孤病毒科正呼腸孤病毳屬成員,是仔豬病毒性腹瀉主要原因之一。豬呼腸孤病毒在豬群中廣泛存在,對豬具有一定的致病性。另外,健康豬群體內(nèi)會存在豬呼腸孤病毒。利用豬呼腸孤病毒感染未吃初乳初生仔豬會引起豬的體溫升高以及腹污等癥狀。由于豬呼腸孤病毒感染豬的致病機制尚不明確,因此目前還沒有特異性的預防和治療該疾病的方法。因此快速檢測豬呼腸孤病毒有著重要的經(jīng)濟意義。本產(chǎn)品就是以探針法qRT-PCR技術為基礎開發(fā)的專門檢測豬呼腸狐病毒RNA的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高,可以達到100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)豬呼腸狐病毒RNA高度保守區(qū)設計,不會跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5各數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法qRT-PCR反應。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

規(guī)格

包裝

探針法qRT-PCR緩沖液

500μL

0.5mL藍蓋

探針法qRT-PCR酶混合液v2

50μL

0.5mL紅蓋

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋

豬呼腸狐病毒qRT-PCR引物-探針混合液

50次

0.5mL棕色管

豬呼腸狐病毒qRT-PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃蓋

使用手冊

1份

本產(chǎn)品采用五孔盒包裝


使用方法
稀釋標準曲線樣品 以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。如果需要RNA陽性樣品,需要另外訂購。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
7. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)RNA提取試劑盒兼容,也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qRT-PCR反應20μL體系,在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復,則標記N+4個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),1個用于RT-PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理
1.  如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須沒有讀數(shù),或者大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于40。對待測樣品,如果其Ct沒有讀數(shù)、大于或等于40則均為陰性,如果小于40則為陽性。

自備試劑
樣品RNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期1年
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