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副流感嗜血桿菌探針法qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
副流感嗜血桿菌（Haemophilus parainfluenzae）是巴氏桿菌科嗜血桿菌屬的一種革蘭氏陰性細(xì)菌，具有無動力和無芽孢的特征，呈球桿狀、絲狀等多種形態(tài)。副流感嗜血桿菌是一種機(jī)會性病原體，通常發(fā)生在嬰兒和兒童中，可引起廣泛的局部和侵襲性感染，包括肺炎、腦膜炎或血流感染，同時副流感嗜血桿菌與支氣管炎、心內(nèi)膜炎、中耳炎、化膿性關(guān)節(jié)炎和生殖道感染有關(guān)。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，副流感嗜血桿菌對各種抗菌藥物的耐藥呈總體上升趨勢，其中對青霉素、阿莫西林的耐藥嚴(yán)重，因此快速檢測副流感嗜血桿菌具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測副流感嗜血桿菌的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
副流感嗜血桿菌（Haemophilus parainfluenzae）是巴氏桿菌科嗜血桿菌屬的一種革蘭氏陰性細(xì)菌，具有無動力和無芽孢的特征，呈球桿狀、絲狀等多種形態(tài)。副流感嗜血桿菌是一種機(jī)會性病原體，通常發(fā)生在嬰兒和兒童中，可引起廣泛的局部和侵襲性感染，包括肺炎、腦膜炎或血流感染，同時副流感嗜血桿菌與支氣管炎、心內(nèi)膜炎、中耳炎、化膿性關(guān)節(jié)炎和生殖道感染有關(guān)。隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，副流感嗜血桿菌對各種抗菌藥物的耐藥呈總體上升趨勢，其中對青霉素、阿莫西林的耐藥嚴(yán)重，因此快速檢測副流感嗜血桿菌具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測副流感嗜血桿菌的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/mL。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)副流感嗜血桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 mL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
1mL本色管 |
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熒光PCR模板專用稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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副流感嗜血桿菌探針法qPCR引物-探針混合干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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副流感嗜血桿菌探針法qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/mL) |
50mL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/ mL這6個10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/ mL這6個10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 mL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號管中加入5 mL 1×10E7拷貝/mL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 mL 1×10E6拷貝/mL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 mL 1×10E5拷貝/mL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 mL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（用第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
