購(gòu)物車(chē)
幫助
021-54845833/15800441009
大腸桿菌總RNA殘留探針?lè)╭PCR試劑盒(不含內(nèi)參)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
大腸桿菌是生物制品生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛的宿主細(xì)胞之一。理論上，存在于生物制品中的微量大腸桿菌RNA殘留都可能轉(zhuǎn)導(dǎo)到人體細(xì)胞， 可能導(dǎo)致癌變或其他病理變化。因此，宿主細(xì)胞RNA殘留量的控制是生物制品質(zhì)量控制中非常重要的環(huán)節(jié)，對(duì)殘留RNA檢測(cè)具有重要的意義。為此本公司，開(kāi)發(fā)了基于熒光定量RT-PCR技術(shù)的、專門(mén)用于檢測(cè)樣品中大腸桿菌總RNA殘留的本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
產(chǎn)品及特點(diǎn)
大腸桿菌是生物制品生產(chǎn)中應(yīng)用較為廣泛的宿主細(xì)胞之一。理論上，存在于生物制品中的微量大腸桿菌RNA殘留都可能轉(zhuǎn)導(dǎo)到人體細(xì)胞， 可能導(dǎo)致癌變或其他病理變化。因此，宿主細(xì)胞RNA殘留量的控制是生物制品質(zhì)量控制中非常重要的環(huán)節(jié)，對(duì)殘留RNA檢測(cè)具有重要的意義。為此本公司，開(kāi)發(fā)了基于熒光定量RT-PCR技術(shù)的、專門(mén)用于檢測(cè)樣品中大腸桿菌總RNA殘留的本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到0.001pg/μL。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物和探針是根據(jù)大腸桿菌RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)晒舛縍T-PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以100pg-0.001pg/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
規(guī)格及成分
|
成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
|
探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液 |
0.5mL |
0.5 mL綠蓋管 |
|
探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液V2.0 |
0.5mL |
0.5mL紅蓋管 |
|
熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠色蓋 |
|
大腸桿菌qPCR引物-探針混合液 |
150μL |
0.5mL棕色管 |
|
大腸桿菌RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照(100pg/μL) |
50μL |
0.5mL黃色蓋 |
|
使用手冊(cè) |
1份 |
1份 |
|
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
||
|
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
||
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以100pg-0.001pg/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×100pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10pg/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1pg/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1pg/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得100ng/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到從100pg/μL 到1ng/μL 共6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品RNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸純化試劑盒所要求的其實(shí)樣本體積相同。NC可以用水替代。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸純化試劑盒兼容。
Probe qRT-PCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
8. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于RT-PCR陽(yáng)性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
9. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加）：
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照(包括標(biāo)曲樣本)或樣本制備陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果為陰性，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果RT-PCR陰性對(duì)照或樣本制備陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
2. 如果陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 對(duì)定量檢測(cè)，以標(biāo)曲樣本濃度的log值為橫軸，分別以陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本的Ct值（FAM通道）為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，r2必須大于0.95。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出RNA濃度的log值，再推算出RNA的濃度。
3. 對(duì)定量檢測(cè)，以標(biāo)曲樣本濃度的log值為橫軸，分別以陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本的Ct值（FAM通道）為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，r2必須大于0.95。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出RNA濃度的log值，再推算出RNA的濃度。
4. 對(duì)定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照FAM通道的Ct必須大于或等于40。陽(yáng)性對(duì)照FAM通道的熒光信號(hào)必須有對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對(duì)待測(cè)樣品，如果其FAM通道的Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果其HEX通道的Ct大于或等于40則為陰性，如果小于或等于35則為陽(yáng)性。如果在35-40之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性，如果小于40，則為陽(yáng)性。
自備試劑
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
自備試劑
樣品RNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年
