產品及特點

小鼠微小病毒（Minute Virus of Mice，MVM）是副病毒科的小型無包膜單鏈DNA病毒，全長約5-6kb。小鼠微小病毒廣泛在在于實驗小鼠和野生小鼠樣中,具有高度傳染性。MVM主要是通過都毒小鼠糞便和尿液向外排擊,易感小鼠經直接成問撰接觸而感染,也可經胎盤垂直傳播/但不能通過空氣傳播。MVM感染小鼠后，通帶無明顯臨床癥狀，但研究表明，在涉及免疫系統，腫瘤和移植實驗中，實驗小鼠小鼠染了MVM將會嚴重影響實驗數的準確性和可信性，因此快速檢測小鼠微小病毒具有重要意義。本產品是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測小鼠微小病毒的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據小鼠微小病毒DNA高度保守區設計，不會跟其他病毒的DNA發生交叉反應。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。

6. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

7. 本產品只能用于科研。

規格及成分

成分	規格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	500μL	0.5mL本色管
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
超純水	1mL	1.5mL藍蓋管
小鼠微小病毒qPCR引物-探針干粉	50次	0.5mL棕色管
小鼠微小病毒qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊	1份	1份
本產品采用五孔盒包裝
注意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，

下同）。

3. 在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備

7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

Probe qPCR 反應20μL體系，在樣品制備室進行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數據處理

1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要重做擴增或制備或跟廠家聯系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性，說明環境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要跟廠家聯系，購買新的引物和探針。

2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續分析。

3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
樣品DNA

運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年

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021-54845833/15800441009

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