羊亞科源性成分探針法qPCR試劑盒

產品及特點
本試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有羊亞科的成分。羊亞科包括綿羊和山羊?，F代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質地等特性，因此傳統的感官鑒別技術已經無法對食材的真偽進行準確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的、快速靈敏的食材來源檢測技術將對食品監管和安全提供重要的保障。此外還有很多情況需要檢測非食品樣本中是否有羊亞科源性成分。本產品就是為滿足這些需求根據PCR原理開發的產品，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經過優化，靈敏度高，低檢測限可達100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據羊亞科基因組DNA高度保守區設計，不會跟其它生物的DNA發生交叉反應。

5. 既可定性檢測，又可定量檢測。定量檢測時，線性范圍至少5個數量級。

6. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。

7. 本產品只能用于科研。

規格及成分

成分	規格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色管
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
超純水	1mL	1.5mL藍蓋管
羊亞科源性成分qPCR引物-探針干粉	50次	0.5mL棕色管
羊亞科源性成分陽性對照(1E7拷貝/μL)	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊	1份	無
本產品采用五孔盒包裝
注意：引物-探針干粉在使用前需要離心，然后在離心管中加入165 mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法
稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例

由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6、5、4、3、2、1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭（下同）。

3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 依次重復上面的操作得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備

7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

qPCR 反應20 μL體系，在樣品制備室進行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數據處理

1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要重做擴增或制備或跟廠家聯系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性，說明環境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數據，需要跟廠家聯系，購買新的引物和探針。

2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續分析。

3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
樣品DNA，超純水

運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年

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