購物車
幫助
021-54845833/15800441009
產品及特點
生物制品中的非目標DNA 殘留作為工藝相關雜質，具有一定的風險性，包括致瘤性、感染性以及免疫原性等。腺相關病毒 (Adeno－Associated Virus，AAV) 由于自身高穩定性及安全性、低免疫原性等特點在基因治療領域備得到廣泛的用于，目前市面上 基因治療用AAV大多數為重組腺相關病毒 ( Recombinat Adeno-Associated Virus，rAAV) 載體，相關指導原則中明確指出應當在質量監控環節加以監控，因此檢測重組腺相關病毒殘留DNA具有重要的意義，為此本公司基于熒光定量PCR技術，開發了專門用于檢測樣品中重組腺相關病毒殘留DNA的本產品，它具有下列特點：
生物制品中的非目標DNA 殘留作為工藝相關雜質，具有一定的風險性，包括致瘤性、感染性以及免疫原性等。腺相關病毒 (Adeno－Associated Virus，AAV) 由于自身高穩定性及安全性、低免疫原性等特點在基因治療領域備得到廣泛的用于，目前市面上 基因治療用AAV大多數為重組腺相關病毒 ( Recombinat Adeno-Associated Virus，rAAV) 載體，相關指導原則中明確指出應當在質量監控環節加以監控，因此檢測重組腺相關病毒殘留DNA具有重要的意義，為此本公司基于熒光定量PCR技術，開發了專門用于檢測樣品中重組腺相關病毒殘留DNA的本產品，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到0.001 pg/μL。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物和探針是根據重組腺相關病毒DNA高度保守區設計，不會跟其他生物的DNA發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。
6. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。
規格及成分
|
成分 |
規格 |
包裝 |
|
2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
|
熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠色蓋 |
|
超純水 |
1mL |
1.5mL藍色蓋 |
|
重組腺相關病毒殘留qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
|
重組腺相關病毒殘留qPCR陽性對照(100 pg/μL) |
50μL |
0.5mL黃色蓋 |
|
使用手冊 |
1份 |
無 |
|
本產品采用五孔盒包裝 |
||
|
注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162 μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
||
使用方法
稀釋標準曲線樣品以100 pg-0.001 pg/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6、5、4，3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號管中加入5 μL 1×100 pg/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10 pg/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10 pg/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1 pg/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1pg/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得100 ng/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到從100 pg/μL 到1 ng/μL 共6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸純化試劑盒所要求的其實樣本體積相同。NC可以用水替代。本試劑盒跟市場上大多數核酸純化試劑盒兼容，也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應20 μL體系，在樣品制備室進行
8. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數據處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數據，需要重新樣本制備，重新進行PCR擴增或跟廠家聯系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結果為陽性，說明環境污染，則整個實驗無效，不需要分析數據，需要跟廠家聯系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常，則實驗有效，可以進入后續分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
