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偽狂犬病病毒探針法qPCR試劑盒
產品及特點
偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，會引起偽狂犬病，病豬的臨床癥狀和病程隨年齡不同而有很大差異：哺乳仔豬為敏感，15日齡以內的仔豬常表現為急性型，主要表現為體溫升高、拉稀、發抖、運動不協調、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運動，昏迷死亡；育肥豬則大多數伴有體溫升高，呼吸困難，一般不發生死亡，耐過后呈長朗隱性感染帶毒或排毒；成年豬常不呈現可見臨床癥狀或僅表現為輕微體溫升高，一般不發生死亡。母豬妊娠初期，可在感染后的20天左右發生流產，在妊娠后期，經常發生死胎和木乃伊，或者產出弱胎和死胎。在完成豬瘟凈化的地區，偽狂犬病被認為是對經濟影響大的豬病毒病，因此偽狂犬病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
產品及特點
偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）又稱豬皰疹病毒Ⅰ型，會引起偽狂犬病，病豬的臨床癥狀和病程隨年齡不同而有很大差異：哺乳仔豬為敏感，15日齡以內的仔豬常表現為急性型，主要表現為體溫升高、拉稀、發抖、運動不協調、流涎、頸部肌肉僵硬、四肢劃水樣運動，昏迷死亡；育肥豬則大多數伴有體溫升高，呼吸困難，一般不發生死亡，耐過后呈長朗隱性感染帶毒或排毒；成年豬常不呈現可見臨床癥狀或僅表現為輕微體溫升高，一般不發生死亡。母豬妊娠初期，可在感染后的20天左右發生流產，在妊娠后期，經常發生死胎和木乃伊，或者產出弱胎和死胎。在完成豬瘟凈化的地區，偽狂犬病被認為是對經濟影響大的豬病毒病，因此偽狂犬病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的偽狂犬病病毒探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據偽狂犬病病毒設計，不會跟其他病毒株DNA發生交叉反應。
5. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
6. 本產品只能用于科研。
規格及成分
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成分 |
規格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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偽狂犬病病毒qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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偽狂犬病病毒qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針混合干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應20μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于35。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于35，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于35，則為陰性。如果Ct小于35則為陽性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
低溫運輸，-20℃保存，有效期1年
