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巴爾通體通用探針法qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn)
巴爾通體（Bartonella spp.）是一群廣泛分布于全球、能夠引起多種人獸共患病的細(xì)菌，屬于假單胞菌門、α-變形菌綱、生絲微菌目、巴爾通體科。巴爾通體寄生于宿主動(dòng)物的紅細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，通過蚤、體虱等吸血節(jié)肢動(dòng)物傳播，其宿主分布廣泛，包括食肉目貓科和犬科等動(dòng)物、偶蹄目鹿科和牛科等反芻動(dòng)物、嚙齒目動(dòng)物、靈長目動(dòng)物以及翼手目蝙蝠等哺乳動(dòng)物。巴爾通體能引起貓抓病、卡瑞恩病、心內(nèi)膜炎和其他感染性疾病，給人類和動(dòng)物健康造成極大威脅。因此巴爾通體的快速檢測具有重要意義，為此本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了巴爾通體的檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能
產(chǎn)品及特點(diǎn)
巴爾通體（Bartonella spp.）是一群廣泛分布于全球、能夠引起多種人獸共患病的細(xì)菌，屬于假單胞菌門、α-變形菌綱、生絲微菌目、巴爾通體科。巴爾通體寄生于宿主動(dòng)物的紅細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中，通過蚤、體虱等吸血節(jié)肢動(dòng)物傳播，其宿主分布廣泛，包括食肉目貓科和犬科等動(dòng)物、偶蹄目鹿科和牛科等反芻動(dòng)物、嚙齒目動(dòng)物、靈長目動(dòng)物以及翼手目蝙蝠等哺乳動(dòng)物。巴爾通體能引起貓抓病、卡瑞恩病、心內(nèi)膜炎和其他感染性疾病，給人類和動(dòng)物健康造成極大威脅。因此巴爾通體的快速檢測具有重要意義，為此本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了巴爾通體的檢測試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高，最低檢測限可達(dá)100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)巴爾通體基因組DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其它生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)，線性范圍至少5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR模板專用稀釋 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍(lán)蓋管 |
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巴爾通體qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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巴爾通體陽性對(duì)照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊(cè) |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要離心，然后在離心管中加入165μL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能
污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭（下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對(duì)照(上步所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 依次重復(fù)上面的操作得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用10 μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對(duì)照（直接用第6步第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴(kuò)增陽性對(duì)照或制備陽性對(duì)照結(jié)果為陰性，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對(duì)照或制備陰性對(duì)照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對(duì)照和陽性對(duì)照正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對(duì)照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
超純水，樣品DNA
超純水，樣品DNA
運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年
