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品質保證 · 通蔚試劑

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產品中心

  • 空腸彎曲桿菌探針法qPCR試劑盒

    規格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10416
    • 應用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 1年
    • 規格 :50T
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空腸彎曲桿菌探針法qPCR試劑盒


產品及特點

空腸彎曲桿菌(Campylobacter jejuni)菌體輕度彎曲,似逗點狀,長1.5~5 μm,寬0.2~0.8 μm。菌體一端或兩端有單鞭毛,無莢膜,不形成芽胞。空腸彎曲桿菌是一種人畜共患病病原菌,可以引起人和多種動物(如牛、羊、狗及禽類)發生多種疾病,并且是一種食物源性病原菌。空腸彎曲桿菌感染人后,其分泌的內毒素能侵襲小腸和大腸粘膜,引起急性腸炎,亦可引起腹瀉的暴發流行或集體食物中毒。另外,空腸彎曲桿菌有時可通過腸粘膜進入血液,引起敗血癥和其他臟器感染,如腦膜炎、關節炎、腎盂腎炎等。由于空腸彎曲桿菌對人群普遍易感,因此快速檢測空腸彎曲桿菌對人類健康具有重要的意義。本產品就是以探針法qPCR技術為基礎開發的專門檢測空腸彎曲桿菌的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化,分析靈敏性高,可以達到100拷貝/mL。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據空腸彎曲桿菌DNA高度保守區設計,不會跟其他的DNA發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。
6. 本產品足夠50次20 mL體系的探針法熒光定量PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。


規格及成分

成分

規格

包裝

2×Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色管

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋管

超純水

1mL

1.5mL藍蓋管

空腸彎曲桿菌探針法qPCR引物-探針混合干粉

50次

1.5mL棕色管

空腸彎曲桿菌探針法qPCR陽性對照(1×10E7拷貝/mL)

50mL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產品采用五孔盒包裝

意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入162mL的超純水充分混勻后再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/ mL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 mL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。
3. 在6號管中加入5 mL 1×10E7拷貝/mL的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/mL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 mL 1×10E6拷貝/mL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/mL的標準曲線樣品。放冰上待用
5. 換槍頭,在4號管中加入5 mL 1×10E5拷貝/mL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/mL的標準曲線樣品。放冰上待用
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10 mL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品DNA,本試劑盒跟市場上大多數DNA提取試劑盒兼容。
Probe qPCR反應20 mL體系,在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(用第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數據處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結果為陰性,則整個實驗無效,不需要分析數據,需要重新樣本制備,重新進行PCR擴增或跟廠家聯系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結果為陽性,說明環境污染,則整個實驗無效,不需要分析數據,需要跟廠家聯系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常,則實驗有效,可以進入后續分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于40,否則實驗無效。如果實驗有效,則分析待測樣品,如果無Ct或Ct大于或等于40,則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
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