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品質保證 · 通蔚試劑

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產品中心

  • 禽腺病毒I群探針法熒光定量PCR試劑盒

    規格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10001
    • 應用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 2年
    • 規格 :50T
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禽腺病毒I群探針法熒光定量PCR試劑盒

產品及特點
本產品是以探針法熒光定量PCR技術為基礎開發的專門檢測禽腺病毒I群(Fowl Adenovirus Group I,FAdV1)的試劑盒。禽腺病毒I群屬于腺病毒科禽腺病毒屬,是一種無囊膜的雙鏈DNA病毒,基因組大小約為43 kb,是常見的家禽傳染病病原。該病毒衣殼呈規則的20面體結構,直徑約80~110 nm。禽腺病毒I群主要侵害幼齡雞群,特別是3~8周齡的育雛、育成期肉雞,病死率可達 80%。禽腺病毒I群感染給養殖業帶來巨大危害,快速檢測禽腺病毒I群具有重要意義。為此本公司開發了禽腺病毒I群探針法qPCR試劑盒。它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經過優化,靈敏度高,檢測限可達100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性實驗。
4. 特異性高,引物和探針是根據禽腺病毒I群基因組DNA高度保守區設計的,不會跟其它生物的DNA發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時,線性范圍至少5個數量級。
6. 本產品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。

規格及成分

成分

規格

包裝

2×Probe qPCR MasterMix

0.5mL

0.5mL本色管

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠蓋管

超純水

1mL

1.5mL藍蓋管

禽腺病毒I群qPCR引物-探針干粉

50次

0.5mL棕色管

禽腺病毒I群陽性對照(1E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃蓋管

使用手冊

1份

本產品采用五孔盒包裝

意:引物探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后得到引物探針混合液再使用,未用完的需要-20℃保存。


使用方法

稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭(下同)。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得),充分震蕩混勻1分鐘,得到1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 依次重復上面的操作得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qPCR反應20μL體系,在樣品制備室進行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復,則標記N+4個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照(用水做模板),1個用于PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。


數據處理
1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結果為陰性,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數據,需要重做擴增或制備或跟廠家聯系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結果為陽性,說明環境污染,則整個擴增或制備實驗無效,不需要分析數據,需要跟廠家聯系,購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常,則實驗有效,可以進入后續分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于40,否則實驗無效。如果實驗有效,則分析待測樣品,如果無Ct或Ct大于或等于40,則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
超純水,樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期2年
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