咖啡漿果炭疽病菌(Colletotrichum kahawae)是一種盤長孢狀刺盤孢菌落圓形真菌,邊緣整齊明顯,發病初期為白色,后期轉為不同程度的灰褐色,第3~5天菌落上散生大量粉紅色或橘黃色孢子團,后期由粗壯的褐色菌絲形成菌核結構??Х葷{果炭疽病菌引起咖啡炭疽病全年均可發生,高溫干旱季節發病較輕,高溫高濕季節較為嚴重。該病以菌絲體或子實體在咖啡病葉、病枝和漿果上越冬,并作為翌年初侵染源。咖啡炭疽病可導致枯枝、落葉和20~30%的產量損失,嚴重時產量損失達80%。該病可危害咖啡葉片、枝條和漿果等組織。因此快速檢測咖啡漿果炭疽病菌具有重要的意義。為此,本公司以探針法qPCR技術為基礎開發了咖啡漿果炭疽病菌的檢測試劑盒,它具有下列特點:
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成分 |
規格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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咖啡漿果炭疽病菌qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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咖啡漿果炭疽病菌qPCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產品采用五孔盒包裝 |
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注 意:引物-探針干粉在使用前需要短暫離心,然后在離心管中加入165 μL的超純水充分混勻后得到引物-探針混合液再使用,未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
數據處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結果為陰性,則整個實驗無效,不需要分析數據,需要重新樣本制備,重新進行PCR擴增或跟廠家聯系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結果為陽性,說明環境污染,則整個實驗無效,不需要分析數據,需要跟廠家聯系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常,則實驗有效,可以進入后續分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須沒有讀數,或者大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于40。對待測樣品,如果其Ct沒有讀數、大于或等于40則均為陰性,如果小于40則為陽性。
樣品DNA,超純水,核酸純化試劑盒
低溫運輸,-20℃保存,有效期1年
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