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人皰疹病毒6型探針法qPCR試劑盒
產(chǎn)品及特點
人皰疹病毒6型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）屬皰疹病毒科β亞科，為1986年從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒。HHV-6病毒顆粒呈球形，有包膜，平均直徑約為150納米，基因組為線狀雙鏈DNA。其基因結(jié)構(gòu)和抗原性與其他已知的5種皰疹病毒不同。HHV-6為嗜淋巴細胞病毒，可在T型及B型淋巴細胞內(nèi)復制。根據(jù)抗原性不同，又可將HHV-6分為A、B兩組。HHV-6與人巨細胞病毒(HCMV /HHV-5)宿主相似，主要感染CD4+T細胞、CD8+T細胞、單核巨噬細胞和NK細胞，亦可在唾液腺、乳腺、腎臟中潛伏并持續(xù)進行低密度復制。病毒在淋巴細胞內(nèi)復制時可產(chǎn)生明顯的細胞病變，并導致宿主細胞破裂、溶解。HHV-6可通過唾液飛沫及密切接觸、輸血或器官移植傳播。除免疫低下外，絕大多數(shù)人感染后終身都不會產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀，此時會出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規(guī)模感染T淋巴細胞，使免疫功能進一步削弱，對人體健康產(chǎn)生較大影響，因此人皰疹病毒6型的快速準確鑒定對該病的預防和治療有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的HHV-6探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
產(chǎn)品及特點
人皰疹病毒6型（Human Herpesvirus-6，HHV-6）屬皰疹病毒科β亞科，為1986年從淋巴增生性疾病和艾滋病患者淋巴細胞中培養(yǎng)獲得的一種新病毒。HHV-6病毒顆粒呈球形，有包膜，平均直徑約為150納米，基因組為線狀雙鏈DNA。其基因結(jié)構(gòu)和抗原性與其他已知的5種皰疹病毒不同。HHV-6為嗜淋巴細胞病毒，可在T型及B型淋巴細胞內(nèi)復制。根據(jù)抗原性不同，又可將HHV-6分為A、B兩組。HHV-6與人巨細胞病毒(HCMV /HHV-5)宿主相似，主要感染CD4+T細胞、CD8+T細胞、單核巨噬細胞和NK細胞，亦可在唾液腺、乳腺、腎臟中潛伏并持續(xù)進行低密度復制。病毒在淋巴細胞內(nèi)復制時可產(chǎn)生明顯的細胞病變，并導致宿主細胞破裂、溶解。HHV-6可通過唾液飛沫及密切接觸、輸血或器官移植傳播。除免疫低下外，絕大多數(shù)人感染后終身都不會產(chǎn)生明顯癥狀；免疫低下者，潛伏的病毒可被激活并產(chǎn)生急性感染癥狀，此時會出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、腦炎、腦膜炎、肝炎及多器官衰竭等癥狀，活化的病毒可大規(guī)模感染T淋巴細胞，使免疫功能進一步削弱，對人體健康產(chǎn)生較大影響，因此人皰疹病毒6型的快速準確鑒定對該病的預防和治療有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的HHV-6探針法熒光定量PCR檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏度高，能達到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)人皰疹病毒6型DNA高度保守區(qū)設(shè)計，不會跟其他病毒的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5各數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色蓋 |
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熒光PCR模板專用稀釋 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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人皰疹病毒6型qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
1.5mL棕色管 |
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人皰疹病毒6型PCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入165uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次核酸純化所要求的起始樣品體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的相關(guān)產(chǎn)品和免核酸純化樣本釋放劑。
Probe qPCR反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進行PCR擴增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。
2. 如果陰性對照和陽性對照均正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA
樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
