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品質保證 · 通蔚試劑

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產品中心

  • 蓋塔病毒探針法qRT-PCR試劑盒

    規格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E10437
    • 應用 : 僅限于科研使用
    • 貨期 : 1年
    • 規格 :50T
  • 商品詳情
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產品及特點

蓋塔病毒(Getah virus,GETV)屬于RNA病毒披膜病毒科甲病毒屬成員,是一種經蚊蟲在脊椎動物中傳播的蟲媒病毒,廣泛分布于東南亞和東亞地區。已證實GETV可引起家畜的疾病,如日本和印度曾多次發生該病毒感染馬或豬而導致的疾病流行,近期我國湖南省某地豬群中也發生蓋塔病毒病的流行。GETV血清學調查表明,人、多種家畜及某些野生動物中也存在該病毒感染,亞洲、歐洲、大洋洲一些國家的人、豬、馬、牛、山羊、犬、兔、袋鼠、雞和野鳥血清中均檢測到GETV病毒抗體,因此快速檢測蓋塔病毒具有重要的意義。本產品就是以探針法熒光定量RT-PCR技術為基礎開發的專門檢測蓋塔病毒的試劑盒,它具有下列特點:

1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經過優化,分析靈敏性高,可以達到100拷貝/反應。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據蓋塔病毒RNA高度保守區設計,不會跟其他生物的RNA發生交叉反應。
5. 既用于定性檢測,又用于定量檢測。定量檢測時線性范圍至少為5個數量級。
6. 本產品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量qRT-PCR反應。
7. 本產品只能用于科研。

規格及成分

成分

規格

包裝

探針法qRT-PCR緩沖液

500μL

0.5mL藍

探針法qRT-PCR酶混合液v2

50μL

0.5mL紅

熒光PCR專用模板稀釋液

1mL

1.5mL綠

蓋塔病毒qRT-PCR引物-探針混合液

50次

0.5mL棕

蓋塔病毒qRT-PCR陽性對照(1×10E7拷貝/μL)

50μL

0.5mL黃

使用手冊

1份

本產品采用五孔盒包裝


使用方法

稀釋標準曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同)。
3. 在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在4號管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品,設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)。可以用10μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場上大多數樣品RNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
Probe qRT-PCR反應20μL體系,在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復,則標記N+9個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復,則標記N+4個RT-PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于RT-PCR陰性對照(用水做模板),1個用于RT-PCR陽性對照(直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數據處理
1. 如果把本試劑盒用于定量檢測,則以陽性對照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值,再推算出其濃度。
2. 如果把本試劑盒用于定性檢測,只判斷陽性或陰性,則陰性對照Ct必須沒有數值,等于或者大于40。陽性對照必須有熒光對數增長,有典型擴增曲線,Ct值應該小于40。對待測樣品,如果其Ct小于40則為陽性。如果沒有Ct值,或大于或等于40則為陰性。

自備試劑
樣品RNA
運輸及保存
低溫運輸,-20℃保存,有效期1年
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