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產(chǎn)品及特點
雞痘病毒（Fowl Pox Virus，F(xiàn)PV）屬于痘病毒科禽痘病毒屬，為雙股線狀DNA病毒，基因組長約300 kb。雞痘病毒侵染各種年齡和品種的雞，但雛雞的敏感性高。患病雞和帶毒雞是雞痘病的主要傳染源，蚊子、螨蟲等也可攜帶雞痘病毒，通過叮咬、寄生等途徑導致健康雞發(fā)病，引起皮膚型痘和粘膜型病變，后者即所謂的雞白喉，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了較大經(jīng)濟損失，因此快速檢測雞痘病毒具有重要意義。為此本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了雞痘病毒的檢測試劑盒，它具有下列特點：
雞痘病毒（Fowl Pox Virus，F(xiàn)PV）屬于痘病毒科禽痘病毒屬，為雙股線狀DNA病毒，基因組長約300 kb。雞痘病毒侵染各種年齡和品種的雞，但雛雞的敏感性高。患病雞和帶毒雞是雞痘病的主要傳染源，蚊子、螨蟲等也可攜帶雞痘病毒，通過叮咬、寄生等途徑導致健康雞發(fā)病，引起皮膚型痘和粘膜型病變，后者即所謂的雞白喉，給養(yǎng)雞業(yè)帶來了較大經(jīng)濟損失，因此快速檢測雞痘病毒具有重要意義。為此本公司以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)了雞痘病毒的檢測試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏度高，檢測限可達100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)雞痘病毒基因組DNA高度保守區(qū)設(shè)計，可以檢測本屬的主要物種，不會跟其它生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時，性范圍至少5個數(shù)量級。
6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分 |
規(guī)格 |
包裝 |
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2×Probe qPCR MasterMix |
0.5mL |
0.5mL本色管 |
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熒光PCR專用模板稀釋液 |
1mL |
1.5mL綠蓋管 |
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超純水 |
1mL |
1.5mL藍蓋管 |
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雞痘病毒qPCR引物-探針干粉 |
50次 |
0.5mL棕色管 |
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雞痘病毒qPCR陽性對照(1E7拷貝/μL) |
50μL |
0.5mL黃蓋管 |
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使用手冊 |
1份 |
無 |
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本產(chǎn)品采用五孔盒包裝 |
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注 意：引物-探針干粉在使用前需要離心，然后在離心管中加入165 mL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。 |
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使用方法
稀釋標準曲線樣品以1E1-1E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例
由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能
污染樣品或本試劑盒的其他成分。本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供DNA片段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6、5、4、3、2、1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭（下同）。
3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL的陽性對照(上步所得)，充分震蕩混勻1分鐘，得到1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 依次重復上面的操作得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備
7. 如果有N個樣品，設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
qPCR 反應(yīng)20 μL體系，在樣品制備室進行
9. 如果做定量分析并且只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做1次重復，則標記N+4個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照（用水做模板），1個用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
數(shù)據(jù)處理
1. 如果擴增陽性對照或制備陽性對照結(jié)果為陰性，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴增陰性對照或制備陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個擴增或制備實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購買新的引物和探針。
2. 如果陰性對照和陽性對照正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。
3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。
4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
超純水，樣品DNA
超純水，樣品DNA
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年
