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產品簡介
產品名稱 ： 人肺癌成纖維細胞
產品品牌 ： 通蔚生物
組織來源 ： 肺癌組織
產品規格 ： 5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
人肺癌成纖維細胞分離自肺癌組織；肺癌是最常見的肺原發性惡性腫瘤，絕大多數肺癌起源于支氣管粘膜上皮，故亦稱支氣管肺癌。肺癌可向四周乃至全身擴散。肺癌發病率和死亡率增長最快，對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來許多國家都報道肺癌的發病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長期大量吸煙與肺癌的發生有非常密切的關系。肺癌，其實不是一種病，而是幾十種病的組合，有多種亞型，多種特性；根據肺癌細胞在顯微鏡下的形態特點，可以初步分為兩種類型：小細胞肺癌(SC LC )15% 和非小細胞肺癌(N SC LC )85% 。
這兩種類型肺癌的生長特點、擴散風險和治療方案均不相同。絕大多數肺癌是非小細胞肺癌，約占85% 。它又能進一步被分為三類，分別是：腺癌，鱗癌和大細胞癌。其中腺癌是最主要的類型，約占非小細胞肺癌中的50% 。如果是不吸煙的女性患者，幾乎全部都是腺癌。人肺癌成纖維細胞是肺癌組織中的癌相關成纖維細胞，癌相關成纖維細胞(cancer associated fibroblast，C A F)在腫瘤微環境中的重要作用已受到廣泛的重視。
該細胞通過與癌細胞的直接接觸、分泌多種因子以及對腫瘤基質的改造，促進腫瘤的發生、發展、轉移甚至耐藥性的發生。隨著研究的深入，有人提出C A F可能成為抗腫瘤治療的新靶點。然而C A F的分化來源多樣，相應的形態和功能各異，因此深入了解C A F的分化來源有利于更全面地認識腫瘤發展的機制，為臨床治療提供理論依據，體外培養肺癌成纖維細胞對肺癌研究有重要意義。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人肺癌成纖維細胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人肺癌成纖維細胞經Vim entin免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ： 貼壁不包被
培 養 基 ： 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ： 每2-3天換液一次
生長特性 ： 貼壁
細胞形態 ： 成纖維細胞樣
傳代特性 ： 可傳5代左右；3代以內狀態最佳
傳代比例 ： 1:2
消 化 液 ： 0.25% 胰蛋白酶
培養條件 ： 氣相：空氣，95% ；C O2，5%
人肺癌成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
人肺癌成纖維細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳5代左右；3代以內狀態最佳；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1.取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2.貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0.25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1m g/m l），明膠（0.1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
