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021-54845833/15800441009
產品簡介
產品名稱 ：人皮層神經元細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：腦組織
產品規格 ：5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
人皮層神經元細胞分離自腦皮層組織。皮層神經元細胞是構成中樞神經系統結構和功能的基本單位。神經元是具有長突觸(軸突) 的細胞，它由細胞體和細胞突起構成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經纖維，它的末端的細小分支叫做神經末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經節中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。
細胞體是細胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細胞中央，染色質少，核仁明顯。細胞質內有斑塊狀的核外染色質，還有許多神經元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經元或其他組織，如肌肉或腺體。
皮質神經元是大腦皮質的主要組成細胞之一，是大腦進行功能活動調節的基本單位，參與動物多種中樞神經系統疾病的病理過程。通過形態學觀察顯示神經元從貼壁、伸出突起開始。突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細胞最為豐滿，隨后神經元開始裂解，突起逐漸減少，細胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細胞變形。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人皮層神經元細胞采用胰蛋白酶消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶 。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人皮層神經元細胞經β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ：PLL(0. 1m g/ml)
培 養 基 ：含B-27 Supplem ent、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：神經元細胞樣
傳代特性 ：屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群
傳代比例 ：不傳代
消 化 液 ：0. 125% 胰蛋白酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人皮層神經元細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
人皮層神經元細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈神經元細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞屬于終末分化細胞。屬于不增殖細胞群。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 靜置后，顯微鏡下觀察細胞狀態，拍照記錄細胞的貼壁情況，漂浮的細胞需離心收集后在離心管消化(脫落細胞處理方式) ，貼壁細胞也需消化后與脫落的細胞合并一起后重新接種。
3. 神經元細胞消化
1) 將培養瓶內所有培養基轉入無菌離心管，離心收集細胞(1200rpm5min) ，細胞沉淀按照下面脫落細胞處理方式處理該部分細胞。
2) 培養瓶內貼壁細胞，用PBS(37℃預熱) 清洗細胞一次，將PBS收集到步驟1的離心管中，不要直接丟棄。
3) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，放入4℃冰箱消化細胞3-5min(或者37℃溫浴1min ) 。
4) 倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化(稀釋法終止消化，培養基用量不低于5ml) 。
5) 用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞，1200rpm 5min 離心去除殘留胰酶。
6) 去掉上清，加入適量的完全培養基混勻(可補加1% FB S，促進貼壁) ，接種于孔板中(提前多聚賴氨酸包被孔板) 。
7) 待細胞貼壁后可用于后續相關實驗。
4. 細胞收貨脫落
1) 收集所有細胞懸液，1200rpm 5min離心，保留沉淀。
2) 添加0. 125% 胰蛋白酶消化液(0. 25% 胰酶用PBS稀釋一倍) 1m L至離心管中，輕柔重懸沉淀，放置4℃冰箱靜置3-5min ) 。
3) 消化完向離心管內加入5ml完全培養基終止消化。
4) 經1200rpm ，離心5min，丟棄上清，用5ml完全培養基(可補加1% FBS，促進貼壁) 重懸沉淀，接種于新的培養瓶內。
5) 接種后絕對靜置24-48小時， 48小時后觀察，否則細胞容易聚團。
5. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ （2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/ml），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 神經元細胞貼壁不牢，必須包被培養器皿。細胞遇冷易收縮脫落，所用試劑需37℃預熱，
室溫觀察時間不宜過長。
