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021-54845833/15800441009
新生霉素(NBC)ELISA試劑盒
簡介
新生霉素是一種分離自雪白鏈霉菌的氨基香豆素類抗生素，是一種強效的細菌DNA促旋酶和真核DNA拓撲異構酶II的抑制劑。其抗菌譜為革蘭氏陽性菌，作用機制是特異性靶向參與能量轉移的GyrB亞基活性，進而干擾DNA合成并最終影響細菌生長。類似于其他氨基香豆素類抗生素如氯新生霉素和香豆霉素A1，新生霉素能夠競爭性抑制GyrB催化發生的ATPase酶反應，對DNA回旋酶有很好的抑制作用，并對多種癌細胞有抑制作用，還能與抗癌藥聯合應用，從而逆轉抗癌藥的耐藥性。本酶聯免疫檢測試劑盒可以經濟、快速地檢測血清、組織等樣本中的NBC的殘留量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被偶聯抗原，樣本中NBC和微孔條上預包被的偶聯抗原競爭NBC抗體，加入酶標二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標二抗復合物。隨后結合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的NBC成負相關。通過標準曲線可準確定量樣品中NBC的含量。通過標準曲線計算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數即為實際樣品中NBC的含量。
需要的其他材料
1. 酶標儀，450nm/630nm；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000 mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機；
6. 恒溫培養箱，振蕩器，天平（感量0.01g）；
7. 用于稀釋標準品和樣品的試管；
8. 50mL離心管。
試劑準備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標準品配置
試劑盒中取出標準品，準備7個試管，先將9000ppb標準品（200μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至448ppb（例：50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的448ppb濃度標準品），隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液，在這6個單獨的試管中將448ppb標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度，共配制7個濃度的標準品，依次為：448ppb、224ppb、112ppb、56ppb、28ppb、14ppb、7ppb，從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進行標準品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標準品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據所需用量配置。
酶標二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標二抗稀釋成1×酶標抗體工作液，根據所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標準品最高值，請根據實際情況選擇適當的稀釋倍數 (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實驗之前做預實驗，以確定具體稀釋倍數) ；標準品母液及100×酶標二抗溶液根據實驗所需酶標板孔數吸取一定量配制工作液，剩余溶液應放回-20℃儲存，且避免反復凍融。（若實驗在1-2周內做完，標準品母液及100×酶標抗體置于2-8℃保存；若實驗為長時間跨度實驗，建議將標準品母液及100×酶標抗體置于-20℃保存，以保證實驗結果的穩定性）
結果的計算
計算標準品和樣本復孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出四參數邏輯函數的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數邏輯（4-P）曲線擬合的計算機軟件來創建標準曲線。若樣品OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數。
精密度
批內精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內精度評估。
批內變異系數 CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內精度評估。
批間變異系數 CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為7 ppb。
線性關系
校準品劑量反應曲線相關系數r值，大于等于0.998。
本ELISA試劑盒實驗計算和曲線圖，請您下載產品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
