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021-54845833/15800441009
泰拉霉素(TLM)ELISA試劑盒
簡介
泰拉霉素是第三代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，具有廣譜抗菌作用。與其他大環(huán)內(nèi)酯類的作用機(jī)理相同，能與敏感菌的核蛋白體50s亞基結(jié)合，使肽鏈的合成和延長受阻，影響細(xì)菌蛋白質(zhì)合成。泰拉霉素廣對一些革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌具有抗菌活性，對豬呼吸道的病原菌尤其敏感，如：溶血性巴氏桿菌、出血敗血性巴氏桿菌、睡眠嗜血桿菌、支原體、類胸膜肺炎的放線桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌等。同時(shí)，對引起牛傳染性角膜結(jié)膜炎的牛莫拉氏菌也具有很好的抗菌活性。臨床上，主要用于胸膜肺炎放線桿菌、支原體、巴氏桿菌、副嗜血桿菌、支氣管敗血性博德特菌引起的豬、牛呼吸系統(tǒng)疾病的防治。本酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可以經(jīng)濟(jì)、快速地檢測樣本中泰拉霉素的含量。
檢測原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中泰拉霉素和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭泰拉霉素抗體，加入酶標(biāo)二抗后，形成包被抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物。隨后結(jié)合的酶催化TMB底物顯色，樣本吸光值與其含有的泰拉霉素成負(fù)相關(guān)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可準(zhǔn)確定量樣品中泰拉霉素的含量。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算所得值乘以樣品處理的稀釋倍數(shù)即為實(shí)際樣品中泰拉霉素的含量。
需要的其他材料
1. 酶標(biāo)儀，包含450nm測定波長，同時(shí)包含600-680nm校正波長更佳；
2. 移液器及槍頭；
3. 蒸餾水或去離子水；
4. 100-1000mL刻度量筒；
5. 洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)；
6. 水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度；
7. 用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
試劑準(zhǔn)備
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液（20×）有晶體析出，需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋（例如：1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水）
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品，準(zhǔn)備7個(gè)試管，先將10000 ppb標(biāo)準(zhǔn)品（100μL）按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至270 ppb（例：27μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+973μL的1×稀釋液，制備得到1000μL的270 ppb濃度標(biāo)準(zhǔn)品），隨后在5個(gè)試管中分別加入600μL的1×稀釋液，在這5個(gè)單獨(dú)的試管中將270 ppb標(biāo)準(zhǔn)品依次3倍倍比稀釋至6個(gè)梯度，共配制6個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，依次為：270 ppb、90 ppb、30 ppb、10 ppb、3.33 ppb、1.11 ppb，從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取300μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個(gè)試管中，輕輕吹打混勻，以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋（如圖所示），1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0ppb)。
一抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×一抗工作液稀釋成1×一抗工作液，根據(jù)所需用量配置。
酶標(biāo)二抗工作液配置
使用前10分鐘，用1×稀釋液將100×酶標(biāo)二抗稀釋成1×酶標(biāo)抗體工作液，根據(jù)所需用量配置。
備 注：如樣本中待測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值，請根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù) (建議：將待測樣本用樣品稀釋液最低稀釋1倍，在正式實(shí)驗(yàn)之前做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定具體稀釋倍數(shù)) ；標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)二抗溶液根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需酶標(biāo)板孔數(shù)吸取一定量配制工作液，剩余溶液應(yīng)放回-20℃儲存，且避免反復(fù)凍融。（若實(shí)驗(yàn)在1-2周內(nèi)做完，標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于2-8℃保存；若實(shí)驗(yàn)為長時(shí)間跨度實(shí)驗(yàn)，建議將標(biāo)準(zhǔn)品母液及100×酶標(biāo)抗體置于-20℃保存，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性）
結(jié)果的計(jì)算
計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時(shí)去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯（4-P）曲線擬合的計(jì)算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計(jì)算樣本濃度時(shí)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
精密度
批內(nèi)精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在同一個(gè)板塊內(nèi)精度評估。
批內(nèi)變異系數(shù) CV%小于10%。
批間精密度 ：三組已知的高、中、低濃度樣品，進(jìn)行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。
批間變異系數(shù) CV%小于15%。
回收率
樣本回收率：80% - 120%
靈敏度
經(jīng)樣本測試，本試劑盒的檢測靈敏度為1.11 ppb。
線性關(guān)系
校準(zhǔn)品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9980。
本ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)計(jì)算和曲線圖，請您下載產(chǎn)品說明書(供參考），本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷和治療。
