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021-54845833/15800441009
產品簡介
產品名稱 ：人冠狀動脈平滑肌細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：冠狀動脈
產品規格 ：5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
人冠狀動脈平滑肌細胞分離自冠狀動脈組織。冠狀動脈是供給心臟血液的動脈，起于主動脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動脈的分布分為三型 ：右優勢型、均衡型、左優勢型。左右冠狀動脈是升主動脈的第一對分支。左冠狀動脈為一短干，發自左主動脈竇，經肺動脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。
前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動脈的后室間支相吻合。它是構成冠狀動脈壁的主要細胞成分，細胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性N a+ 通道、多種C a2+ 通道和K + 通道。它們參與了靜息電位的維持與細胞膜電位的復極化、超極化，調節血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動脈粥樣硬化的發展也涉及冠狀動脈平滑肌細胞增殖、炎癥及凋亡等。
因此，原代分離培養的冠狀動脈平滑肌細胞，對研究生理和病理狀態下離子通道及血管張力變化機制具有非常重要的作用。冠狀動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中。
2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏。細胞密度低時，常交織成網狀。密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人冠狀動脈平滑肌細胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的人冠狀動脈平滑肌細胞經α-SM A 免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
培 養 基 ：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：成纖維細胞樣
傳代特性 ：可傳5代左右。3代以內狀態最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人冠狀動脈平滑肌細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
人冠狀動脈平滑肌細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈成纖維細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳5代左右。3代以內狀態最佳。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1) 吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2) 添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
