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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：人源NK細胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：外周血
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細胞培養(yǎng)瓶
細胞簡介
人NK細胞分離自人外周血單個核細胞。NK細胞即自然殺傷細胞(naturalkillercell，NK) 是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細胞、殺傷介質(zhì)。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及胸腺微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。
NK細胞不同于T 、B細胞，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無M H C限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關(guān)。
NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應(yīng)。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞(包括部分細胞系) 、病毒感染細胞、某些自身組織細胞(如血細胞) 、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應(yīng)和移植物抗宿主反應(yīng)。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人外周血NK細胞采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人源NK細胞經(jīng)C D 56免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含IL -2、IL -15、P enicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：懸浮
細胞形態(tài) ：短梭形
傳代特性 ：可傳5代左右。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
人源NK細胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細胞電子版照片
使用方法
人源NK細胞是一種懸浮細胞，細胞形態(tài)呈短梭形，在通蔚生物技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳5代左右。3代以內(nèi)狀態(tài)最佳。建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 懸浮細胞處理
1) 收集T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基至50ml離心管中，用PBS清洗細胞培養(yǎng)瓶1-2次，收集清洗液。
2) 1200-1500rpm 離心3min，棄上清，收集細胞沉淀。
3) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻、分散細胞。將分散好的細胞調(diào)整合適
密度接種至培養(yǎng)器皿中，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4) 若遇到懸浮細胞團塊較大，無法機械吹散時，向步驟2) 中細胞沉淀添加0. 25% 胰蛋白酶消化液2m L至離心管中，用吸-管輕輕吹打混勻，37℃溫浴2-3min，消化結(jié)束后，加入胰酶抑制劑(或血清) 終止消化，用吸管輕輕吹打，分散細胞。1200rpm 離心5min，棄上清，收集細胞沉淀。
5) 加入5ml新鮮完全培養(yǎng)基，用吸管輕輕吹打混勻。按傳代比例進行接種傳代，然后補充
新鮮的完全培養(yǎng)基至5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6) 待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
特殊注意事項
5. 此細胞為懸浮細胞，請注意不要直接倒掉，造成損失。懸浮細胞因多數(shù)胞體較小，離心收集時，請注意懸液中細胞是否收集完全，可適當加大離心轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)或增加離心時間3-5m in，增加細胞獲取量。
