通蔚生物亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)測定意義

注 意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶，廣泛存在于肝、腎、胰等組織中，尤其以肝臟中含量最為豐富。各類肝病患者因肝細胞損傷，血清 LAP 的活性均有不同程度的升高，因此，血清 LAP 活性的檢測能從不同側面反映各種肝病的發生和發展。
測定原理：
LAP 分解 L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 LAP 活性。
自備用品：
酶標儀/可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量(104個)：提取液體積(mL)為 1000~5000：1 的比例(建議 2000 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液)，超聲波破碎細菌或細胞(冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次)；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰
上待測。
組織：按照組織質量(g)：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液)，進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、血清(漿)樣品：直接檢測。
LAP 測定步驟：
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm，蒸餾水調零。
2、 將試劑二轉移至試劑一中充分溶解(如較難溶解，可 50℃水浴加熱約 30min 促進溶解)；在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融。
3、 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 50μL 樣本和 150μL 試劑一，混勻后立即記錄 405nm 處初始吸光值A1 和 2min 后的吸光值 A2，計算 ΔA=A2-A1。
注意事項：若 ΔA 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數。使 A2-A1 小于 0.5，
上海通蔚實業有限公司是一家科研和銷售亮氨酸氨基肽酶(Leucine Aminopeptidase, LAP)科學試劑產品，領域涵蓋化學、分析化學、生命科學和材料科學等基礎創新領域，助力客戶的研究計劃。公司產品有ELISA試劑盒、細胞培養、金標檢測試劑盒、食品檢測試劑盒、分子生物學試劑盒、胎牛血清、科研抗體、生物耗材等。