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最新產(chǎn)品

  • 兔組織因子(TF)ELISA試劑盒

    規(guī)格:
    價格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E3113
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 :Rabbit TF ELISA KIT
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 靈敏度 :3.13pg/mL
    • 規(guī)格 :48T/96T
    • 檢測范圍 :6.25 ~ 400pg/mL
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簡介
組織因子,又稱血小板組織因子、因子III或CD142,由F3基因編碼的蛋白質(zhì),存在于內(nèi)皮下組織和白細胞中,它在凝血過程中的作用是由酶原凝血酶啟動凝血酶的形成,凝血酶定義了導(dǎo)致 X 因子激活的級聯(lián)-組織因子途徑。這樣一來,它就取代了以前命名的外源性途徑,以消除歧義,正常情況下,組織因子位于血管壁外膜細胞,包繞血管的成纖維細胞,肝、脾、腎等器官的纖維囊,及皮膚外層的表皮細胞、腎小球上皮細胞、腦皮質(zhì)、心肌細胞、肺泡巨噬細胞、胃腸道壁、部分生殖泌尿道和子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞中,而在血管中膜或內(nèi)膜層卻很稀少。因此在正常情況下組織因子不存在于循環(huán)中或不與循環(huán)血液接觸,只有當(dāng)血管壁的完整性遭到破壞時TF才暴露于循環(huán)血液,通過激活凝固級聯(lián)反應(yīng)發(fā)揮止血作用。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標板上,捕獲樣品及標準品中的待測物TF,清洗后,再加入生物素標記的檢測抗體進行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣本中TF的濃度。
需要的其他材料
1.  酶標儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
2.  移液器及槍頭;
3.  蒸餾水或去離子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機;
6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀釋標準品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
試劑準備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
標準品配置
試劑盒中取出標準品,準備7個試管,先從8ng/mL標準品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至400pg/mL(例:50μL的標準品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的400pg/mL濃度標準品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨的試管中將400pg/mL標準品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標準品,依次為: 400pg/mL、 200pg/mL、 100pg/mL、
50pg/mL、 25pg/mL、 12.5pg/mL、 6.25pg/mL,從最高濃度標準品溶液中吸取500μL標準品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進行標準品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標準品(0pg/mL)。

兔(TF)ELISA試劑盒

抗體工作液配置

使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。

酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
備 注:如待測樣本中TF濃度高于標準品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計算
計算標準品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)。或者使用能夠生成四參數(shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機軟件來創(chuàng)建標準曲線。
若樣品OD值高于標準曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標準曲線。

標準品濃度(pg/mL)

400

200

100

50

25

12.5

6.25

0

OD值

2.588

1.705

0.972

0.646

0.537

0.242

0.132

0.071

校正OD值

2.517

1.634

0.901

0.575

0.466

0.171

0.061

0


下圖所示標準曲線僅供示例,結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標準品所繪標準曲線為準計算樣本結(jié)果

兔(TF)ELISA試劑盒
重復(fù)性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度
經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為3.13pg/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組兔TF。
其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。
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