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  • 馬β-內(nèi)啡肽(βEP)ELISA試劑盒

    規(guī)格:
    價格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW-E4425
    • 應(yīng)用 : 僅限于科研使用
    • 英文名 :Horse βEP ELISA KIT
    • 貨期 : 現(xiàn)貨
    • 靈敏度 :7.82pg/mL
    • 規(guī)格 :48T/96T
    • 檢測范圍 :15.63 ~ 1000pg/mL
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馬β-內(nèi)啡肽(βEP)ELISA試劑盒
簡介 
β-內(nèi)啡肽是一種內(nèi)源性阿片類神經(jīng)肽和肽類激素,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)的某些神經(jīng)元中產(chǎn)生,β-內(nèi)啡肽被認(rèn)為是內(nèi)源性阿片類和內(nèi)啡肽類神經(jīng)肽的一部分;所有已確定的內(nèi)源性阿片類肽都含有相同的N端氨基酸序列, 即Tyr-Gly-Gly-Phe,后面是-Met 或-Leu,β-內(nèi)啡肽存在于下丘腦的神經(jīng)元, 以及垂體的神經(jīng)元,它來源于β-促腎上腺皮質(zhì)激素,后者在垂體中由一個較大的多肽前體--原腎上腺皮質(zhì)激素(POMC)產(chǎn)生,POMC被裂解為兩種神經(jīng)肽,即促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和β-促腎上腺皮質(zhì)激素,然后,β-內(nèi)啡肽的形成是β-促脂素C端區(qū)域裂解的結(jié)果,產(chǎn)生一個31個氨基酸長的神 經(jīng)肽,具有α-螺旋二級結(jié)構(gòu),然而,POMC也產(chǎn)生其他肽類激素,包括α-和γ-黑素細(xì)胞刺激素(MSH),是由被稱為原激素轉(zhuǎn)化酶的內(nèi)部酶在細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生的。
檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù):將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上,捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測物βEP,清洗后,再加入生物素標(biāo)記的檢測抗體進(jìn)行孵育后清洗,形成“捕獲抗體-抗原-檢測抗體”免疫復(fù)合物,隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育,待孵育結(jié)束后清洗,接著加入TMB顯色后,若樣本中有待測物則顯藍(lán)色,加入終止液停止反應(yīng)。檢測過程中游離的成分均被洗去,用酶標(biāo)儀在450 nm處測OD值,顏色的深淺和樣品中的待測物的含量呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣本中βEP的濃度。
需要的其他材料
1.  酶標(biāo)儀,包含450nm測定波長,同時包含600-680nm校正波長更佳;
2.  移液器及槍頭;
3.  蒸餾水或去離子水;
4.  100-1000 mL刻度量筒;
5.  洗瓶、排槍或自動微孔板清洗機(jī);
6.  水平軌道微孔板振蕩器,能夠保持500±50 rpm的速度;
7.  用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
樣品保存
樣品收集后若在 1 周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),避免反復(fù)凍融,標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
試劑準(zhǔn)備工作
使用前將所有試劑置于室溫平衡30分鐘左右。
洗滌液/稀釋液配置
如果洗滌液/稀釋液(20×)有晶體析出,需在37℃下加熱?晶體全部溶解。用蒸餾水1:20稀釋(例如:1mL 濃縮洗滌液加入19mL的蒸餾水)
標(biāo)準(zhǔn)品配置
試劑盒中取出標(biāo)準(zhǔn)品,準(zhǔn)備7個試管,先從20ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品(200μL)按需吸取一定量用1×稀釋液稀釋至1000pg/mL(例:50μL的標(biāo)準(zhǔn)品母液+950μL的1×稀釋液,制備得到1000μL的1000pg/mL濃度標(biāo)準(zhǔn)品),隨后在6個試管中分別加入500μL的1×稀釋液,在這6個單獨(dú)的試管中將1000pg/mL標(biāo)準(zhǔn)品依次2倍倍比稀釋至6個梯度,共配制7個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,依次為:  1000pg/mL、 500pg/mL、 250pg/mL、 125pg/mL、 62.5pg/mL、 31.25pg/mL、 15.63pg/mL,從最高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中吸取500μL標(biāo)準(zhǔn)品到下一個試管中,輕輕吹打混勻,以此類推進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品的倍比稀釋(如圖所示),1×稀釋液用作零濃度標(biāo)準(zhǔn)品(0pg/mL)。

馬(βEP)ELISA試劑盒

抗體工作液配置
使用前10分鐘,將100×生物素化抗體于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×生物素化抗體稀釋成1×生物素化抗體工作液,根據(jù)所需用量當(dāng)日配置當(dāng)日使用。
酶結(jié)合物工作液配置
使用前10分鐘,將100×SA-HRP溶液于1000×g離心1分鐘,隨后用1×稀釋液將100×SA-HRP稀釋成1×SA-HRP工作液,根據(jù)所需用量配置。
備 注:如待測樣本中βEP濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品最高值,請根據(jù)實際情況選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
結(jié)果的計算
計算標(biāo)準(zhǔn)品和樣本復(fù)孔的平均OD值并減去空白孔的OD值作為校正值。以濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(作圖時去掉空白組的值)?;蛘呤褂媚軌蛏伤膮?shù)邏輯(4-P)曲線擬合的計算機(jī)軟件來創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。
若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
示例數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考,實驗者需根據(jù)自己的實驗數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

標(biāo)準(zhǔn)品濃度(pg/mL)

1000

500

250

125

62.5

31.25

15.63

0

OD值

2.596

1.643

0.967

0.622

0.443

0.298

0.167

0.08

校正OD值

2.516

1.563

0.887

0.542

0.363

0.218

0.087

0


下圖所示標(biāo)準(zhǔn)曲線僅供示例,結(jié)果計算應(yīng)以同次試驗標(biāo)準(zhǔn)品所繪標(biāo)準(zhǔn)曲線為準(zhǔn)計算樣本結(jié)果

馬(βEP)ELISA試劑盒

重復(fù)性
板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于10%。
靈敏度 
經(jīng)樣本測試,本試劑盒的檢測靈敏度為7.82pg/mL。
特異性
該試劑盒測定可識別重組馬βEP。
其他相關(guān)蛋白在稀釋緩沖液中制備為50ng/mL,并測定交叉反應(yīng)性。沒有觀察到明顯的交叉反應(yīng)。
使用ELISA試劑盒之前,請您必須完整閱讀說明書,本產(chǎn)品僅供科研使用,不能于臨床診斷或治療。
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