致瀉性大腸桿菌(致瀉性大腸埃希氏菌)通用PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

能夠引起腸道內(nèi)急性腹瀉的大腸桿菌統(tǒng)稱為致瀉性大腸桿菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）根據(jù)致病性的不同，致瀉性大腸埃希菌被分為五種，即腸致病性大腸埃希氏菌(EPEC)、腸產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC)、腸侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)、腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)和粘附性腸埃希氏菌(EAEC)。，我國發(fā)生的食物中毒事件中，細(xì)菌性食物中毒的人數(shù)最多，占總中毒人數(shù)的 42.8％，其中致瀉性大腸埃希氏菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病的常見病原菌，在我國引起感染性腹瀉的發(fā)病率居所有傳染病之首，因此快速靈敏檢測(cè)致瀉性大腸桿菌具有重要意義。

本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的致瀉性大腸桿菌通用檢測(cè) 試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌）用 PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用 PCR 陽性對(duì)照1×10E8 /μL	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 致瀉性大腸桿菌（致瀉性大腸埃希氏菌）通用PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對(duì)照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對(duì)照致瀉性大腸桿菌致瀉性大腸埃希氏菌通用PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4.按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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