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021-54845833/15800441009
紅斑丹毒絲菌(豬丹毒桿菌)PCR試劑盒
編號
成分
規格
試劑一
PCR MagicMix 3.0
1 mL（紅蓋）
試劑二
超純水
1 mL（亮黃色）
試劑三
紅斑丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）PCR 引物混合液
100 μL（白蓋）
試劑四
紅斑丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）
50 μL（黃蓋）
試劑五
使用手冊
1 份
產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經過精心優化，專一性強，只擴增紅斑丹毒絲菌（豬丹毒桿菌），與其他病原沒有交叉反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規格及成分：
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 紅斑丹毒絲菌（豬丹毒桿菌）PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設置 PCR 反應(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設置N+4個反應。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
成份
N+2 個樣品管
PCR 陰性對照
PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0
各 20μL
20μL
20μL
紅斑丹毒絲菌(豬丹毒桿菌)PCR 引物混合液
各2μL
2μL
2μL
N+2個樣品DNA模板
各18μL
--
--
PCR 陰性對照（水）
--
18μL
--
PCR 陽性對照紅斑丹毒絲菌(豬丹毒桿菌)PCR陽性對照1000倍稀釋液）
--
--
18μL
4. 按下表設置 PCR 反應：
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
|
55℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
40 sec |
|
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產物。電泳檢測 PCR 產物。本產品提供的 PCR Mix 在 擴增結束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現，陰性對照必須無任何擴增，否則實 驗無效。對沒有擴增產物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復 PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
