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021-54845833/15800441009
產品及特點：
內源性逆轉錄病毒是嵌在細胞內基因組的病毒，在豬身體里不會有毒性。異種病毒傳播最典型的例子就是艾滋病病毒從靈長類動物傳播到人類。因此，內源性逆轉錄病毒成為人體移植利用豬器官面臨的一個重大醫療風險問題。本產品根據 PCR 原理開發，可用于科研領域快速檢測豬內源性逆轉錄病毒。
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據豬內源性逆轉錄病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規格及成分：
|
編號 |
成分 |
規格 |
|
試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
|
試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
豬內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
豬內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 豬內源性逆轉錄病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡Ｖ苽渌贸蔀闃悠?RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
成份 N+2 個
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成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
豬內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
豬內源性逆轉錄病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
|
預變性 |
95℃ |
5 min |
|
PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
|
58℃ |
30 sec |
|
|
72℃ |
20 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。
四、特別提示：
本公司的所有產品，僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
