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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus，ISKNV）會引起傳染性脾腎壞死病，是以脾、腎壞死為主要病理特征的一種病毒性疾病。病魚嘴張大，呼吸加快，食欲下降，魚體變黑，有時有抽筋樣顫動；頭部充血，口四周和眼出血；脾臟腫大、糜爛和充血，呈紫黑色；腎臟腫大、充血和潰爛；肝臟腫大，有缺血狀、土黃色或有淤血點(diǎn)等癥狀；常見有腹水，腸內(nèi)有時充滿黃色粘稠物，膽囊腫大；鰓貧血，發(fā)白，伴有寄生蟲或細(xì)菌感染出現(xiàn)出血、腐爛等現(xiàn)象。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國南方淡水養(yǎng)殖的鱖中，具有很高的死亡率，對鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅，嚴(yán)重危害我國鱖養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，因此傳染性脾腎壞死病病毒的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的傳染性脾腎壞死病病毒染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒，
1. 一站式，用戶不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據(jù)傳染性胰臟壞死病病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和 PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。
規(guī)格及成分：
|
編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
|
試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運(yùn)輸及保存：
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 傳染性胰臟壞死病病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設(shè)置RT- PCR 反應(yīng)(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
|
成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
|
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
|
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
|
N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
|
超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
|
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
|
MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
|
過程 |
溫度 |
時間 |
|
逆轉(zhuǎn)錄 |
42℃ |
30 min |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
|
58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴(kuò)增效果。如果陰性對照有擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對照無擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對照必須有預(yù)期條帶出現(xiàn)，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有預(yù)期片段大小的擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
