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產品簡介
產品名稱 ：小鼠附睪上皮細胞
產品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：附睪
產品規格 ：5×105cells/T 25細胞培養瓶
細胞簡介
小鼠附睪上皮細胞分離自附睪組織。附睪（Epididymis）是一個由曲折、細小的管子構成的器官，一端接著輸精管（D uctusdeferens），一端接著睪丸（T estis）的曲細精管，具體結構主要包括輸出小管和附睪管。附睪緊貼睪丸的上端和后緣，可分為頭、體、尾三部。精子離開睪丸后通過輸出小管進入附睪。
附睪具有暫存精液并分泌附睪液營養精子的功能，以促進精子的進一步成熟附睪的功能是暫存精子，促進精子的進一步成熟。精子在附睪內獲得運動能力，總共停留8～17天，最終達到功能上的成熟。在這個過程中，精子除了自身的因素，還受到附睪微環境的影響，這包括了一系列的物理、化學變化和精子形態的改變。
可以說，附睪微環境正常穩定是附睪發揮促成熟這一功能的必要條件。若附睪的功能發生異常，精子則不能成熟，引起不育。附睪上皮含有主細胞、基細胞、亮細胞等幾種類型細胞。基細胞，其頂部離附睪管腔有一定距離，在附睪各部分，其形態沒有差別，一般認為是貯備細胞。另一種主細胞，是維持附睪生理功能的物質基礎，在各區段的主細胞形態結構差別很大，這也反映出各區段的生理功能的差異。
除上皮細胞外，附睪的管壁組織結構也有規律性的變化，附睪管起始段平滑肌有自發地節律性收縮，而尾部平滑肌就沒有這種特點，僅在射精一瞬間出現強烈的節律收縮。作為負責提供適合精子成熟微環境的附睪，具有活躍的分泌與吸收功能。其中，附睪上皮的電解質和水分的轉運，對保持附睪內合適的離子濃度和酸堿度，為精子成熟提供適宜的環境起著相當重要的作用。
睪丸的支持細胞每天能產生大量睪網液，如一只公羊每天約能分泌40毫升睪網液，而從附睪排出的只不過幾百微升，也就是說睪丸分泌液有99% 被附睪上皮重新吸收回體內。動物實驗表明，結扎輸精管時睪丸不會腫脹，但若結扎睪丸輸出小管，睪丸第二天就會腫脹，這就充分證實了附睪存在著強有力的吸收功能，但是重新吸收的意義尚不清楚。體外培養附睪上皮細胞對精子的發育、成熟，不孕不育，附睪生理基礎功能研究具有重要意義。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的小鼠附睪上皮細胞采用膠原酶消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質量檢測
通蔚生物實驗室分離的小鼠附睪上皮細胞經PC K 免疫熒光鑒定，純度可達90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養信息
包被條件 ：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm 2）
培 養 基 ：含FBS、EG F、H ydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、T ransferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每2-3天換液一次
生長特性 ：貼壁
細胞形態 ：上皮細胞樣
傳代特性 ：可傳1-2代
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養條件 ：氣相：空氣，95% 。C O2，5%
小鼠附睪上皮細胞體外培養周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的最佳培養狀態。
細胞培養狀態
發貨時發送細胞電子版照片
使用方法
小鼠附睪上皮細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈上皮細胞樣，在通蔚生物技術部標準操作流程下，細胞可傳1-2代。建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細胞培養瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態。
2. 貼壁細胞消化
1）吸出T25細胞培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養瓶中，輕微轉動培養瓶至消化液覆蓋整個培養瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養基至
5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細胞培養箱中靜置培養。
4）待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養基。
3. 復蘇操作說明
1. 準備好37度水浴鍋，預熱至37度。
2. 準備好T25培養瓶，加入10ml完全培養基（培養基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內凍存細胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內進水導致污染），迅速放于水
浴鍋內，于1min內融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內。
5. 吸取凍存管內細胞懸液，加入步驟2中準備好的T25培養瓶內，8字緩慢搖勻。
6. 培養瓶放于37度C O 2恒溫培養箱內，靜置培養24h，更換新鮮換培養基（注意貼壁細胞、懸浮細胞不同換液操作方法）。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養板、共聚焦培養皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
注意事項
1. 培養基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細胞培養過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細胞貼壁及其生長狀態。
4. 建議客戶收到細胞后前3天每個倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和通蔚生物技術部溝通。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，詳盡告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
